生物制品支原体检测

支原体 NAT 检测的准确性与可靠性受多重因素综合影响，需从人员、方法、设备、试剂耗材、实验室环境五方面严格把控。人员需接受专业培训，熟练掌握 PCR 技术理论与实操流程，积累足够经验并具备责任心，确保操作规范性。方法建立需遵循合理流程并完成充分验证，避免因方法缺陷导致结果偏差。设备方面，PCR 仪与前处理设备的性能、精度、稳定性及定期校准至关重要，直接影响检测数据的重复性。试剂耗材需满足要求：前处理试剂能应对复杂样本基质、耐受常见干扰，检测试剂经性能验证且批间稳定性良好，同时需选用质量合格的耗材。实验室需合理布局，建立完善的管理规范与污染防控措施，为检测提供洁净、可控的环境，避免外部因素干扰。

取样量的科学设计直接影响支原体检测的代表性与灵敏度，需结合样品总体积、基质特性综合考量。法规建议：产品总体积大于1000mL的按无菌检查法取样，10-1000mL 取总体积的 1%，1-10mL 取 100μL，小于1mL的需采用替代取样方案。实际检测中，取样体积越大，灵敏度越高，但需平衡洗脱液消耗与重复检测需求。此外，支原体兼具胞内胞外生存特性，只检测上清会导致漏检，需采用细胞裂解等处理方式，确保覆盖全部污染靶点，提升检测结果的真实性。

细胞和基因治疗领域正加速发展，国内以 CAR-T、间充质干细胞、AAV 基因治疗等新型生物制品势头正盛。这类产品与传统制药差异明显，给支原体检测带来全新挑战：批产量小但批次多，多数待检测样品含高达 10⁷个活细胞，且基质复杂如高蛋白、全血、高浓度质粒等。更关键的是，新型生物制品终末灭菌难度极大，需从起始材料、原物料到全工艺过程严格控污，而支原体污染隐蔽性强、危害大，成为质量安全控制的主要痛点，也推动着检测方法向更高效、抗干扰的方向升级。

支原体是一类无细胞壁的原核微生物，直径只有 0.1-0.8 µm，常规 0.22 µm 细菌过滤器无法有效去除，其污染在细胞培养领域极为普遍。这类微生物会严重干扰培养细胞的表型特征与正常生长，给生物制品质量安全带来极大隐患，且与细菌、真菌污染不同，支原体污染通常不会导致培养液浑浊或细胞可见病变，需通过专业方法检测。基于此，FDA、WHO 等全球监管机构及 USP、EP、ChP 等主流药典均明确要求，对测试细胞库（主细胞库、工作细胞库）、下游细胞培养物、终产品及对照细胞等关键环节开展支原体污染筛查，确保生物制品生产全流程安全可控。

目前支原体检测主要有培养法、指示细胞培养法和核酸扩增技术（NAT）法三类，三者在性能与适用场景上差异明显。培养法作为检测金标准，灵敏度极高，但检测周期长达 28 天，手动操作需数天，依赖较高水平的操作技能，且因使用活菌株作为阳性质控，污染风险高，需在特殊实验室开展，检测前还需进行培养基灵敏度验证。指示细胞培养法为药典认可的传统方法，成本较低，但检测周期仍需 14-20 天，灵敏度偏低，同样存在活菌株污染风险，无法满足快速放行需求。NAT 法（核酸扩增法）检测周期只需 3-7 小时，手动操作时间为数小时，采用灭活菌株降低污染风险，样本需求量少、灵敏度高，但无法区分死菌与活菌，且需要开展充分验证，对操作人员的专业技能有一定要求，已逐步成为生物制药企业产品放行检测的youxia方案。

支原体检测培养法是生物制剂质量控制的关键环节，湖州申科提供的 USP 支原体培养法检测服务，严格遵循USP<63 mycoplasma tests（culture method）>标准，为生物制剂开发与生产提供可靠保障。该方法适用于检测组织或细胞培养物、消化肉液及其他疑似支原体污染的材料，是确保生物技术产品及生产用材料合规性的必要要求。检测周期约 29 天，流程需满足双重要求：每批次培养基必须进行营养特性测试，确保检测效能；供试品需完成抑制物质检测，若生产方法发生变化可能影响检测结果，需重复该测试，避免抑制成分干扰支原体检出，保障检测结果的准确性与可靠性。