江苏疫苗内毒素检测重组级联试剂（rCR）

针对单核细胞活化反应测定法（MAT）通过检测内毒素的生物活性，有效规避低内毒素回收（LER）对內毒素检测的影响。其原理是：热原（包括被掩蔽的 LPS）活化单核细胞表面的 TLR 受体，释放 IL-6 等细胞因子，通过 ELISA 检测 IL-6 浓度，结合标准曲线推算热原含量。即使 LPS 因 LER 改变超分子结构，只要仍具生物活性，就能被 MAT 法识别。这种 “检测活性而非结构” 的特性，使 MAT 法成为 LER 场景下内毒素检测的重要补充，与其他方法协同构建高效可靠的热原防控体系。

湖州申科建立了标准化的低内毒素回收（LER）技术服务流程，全周期支撑内毒素检测优化：7 个自然日内完成客户沟通与 LER 确认，用天然鲎、重组鲎等方法检测并出具报告；60 个自然日开展方法开发，分析 LER 成因（如螯合剂、蛋白质 IP）并研究去掩蔽方案；30 个自然日进行 HTS 验证，完成 3 批 LER 实验与干扰实验，交付稳定试剂盒、操作规程及培训；再协助方法转移与 cGMP 验证。流程每环节均围绕内毒素检测展开，确保企业高效解决 LER 问题，满足法规要求。

低内毒素回收（LER）与传统鲎试剂干扰（抑制 / 增强）在多维度存在差异，准确区分对优化内毒素检测至关重要。表现上，LER 是内毒素回收率＜50%，传统干扰是反应抑制或增强；成因上，LER 由螯合剂 + 表面活性剂协同或蛋白质电荷结合引发，传统干扰因 pH、β- 葡聚糖等导致；排除方式上，LER 时间依赖且无法稀释解决，传统干扰浓度依赖且可通过稀释缓解；确认方法上，LER 需通过保存时间研究（HTS），传统干扰按药典干扰实验评估。明确这些区别能帮助企业排查内毒素检测异常，避免误将 LER 当作普通干扰处理。

如何准备样品进行内毒素检测呢？测试前，需要根据样品实际情况进行样本前处理。大多数样品只需要稀释，使用内毒素检测试剂盒进行测试即可。如果样品有蛋白酶干扰并导致假阳性结果，建议对样品稀释并70°C加热5-15分钟进行热灭活处理。如需要，可以对灭活样品进行进一步稀释后检测。如果样品可能含有受β-葡聚糖，建议使用抗增液。β-葡聚糖可能来自酵母和纤维素材料。如果样品中因含有内毒素结合物而存在抑制，可以尝试使用分散剂。

重组级联试剂作为内毒素检测鲎试剂的理想替代方案，其具备的优势有：①优化的G因子级联反应，无G因子旁路干扰。采用基因重组技术表达鲎血细胞中的C因子（Factor C）、B因子（Factor B）和凝固酶原（Proclotting enzyme），无G因子旁路干扰，排除1，3-β-D葡聚糖假阳性风险。②依然采用动态显色法原理，可沿用天然鲎试剂检测设备。重组级联试剂（rCR）,与天然鲎（动态显色法）具有相同的操作流程、检测设备、分析方法，用户可以沿用天然鲎的仪器、软件、耗材、人员培训、验收程序等，无需投入额外成本。③具有与天然鲎的相同反应机制，检测结果具有等效性。完全模拟了天然鲎试剂的酶联反应，由3种蛋白组成的级联反应机制提供了信号放大的过程，确保了检测的准确性和灵敏度。湖州申科按照药典要求进行替代方法验证，无缝衔接技术转移，助力用户从方法验证到工艺落地，从数据合规到全球申报。

湖州申科生物凝胶法鲎试剂凭借合规性和实用性，成为实验室内毒素定量检测的优先选择。该产品严格符合 USP、EP、中国药典标准，提供 0.03、0.06、0.125、0.25、0.5EU/mL 等多种灵敏度规格，适配不同样品的限值要求。设计上采用大瓶装量（10 反应 / 支），减少瓶间差异和频繁开瓶导致的污染风险，降低单位测试成本。针对血源制品、中药注射剂等复杂基质样品，配套特异性抗增液（NND071）可高效抑制非特异性反应，减少假阳性结果。包装选用易开启西林瓶，避免操作时玻璃碎屑污染，提升使用安全性。凭借千家医院的临床使用经验和稳定的性能表现，该产品更适合血源制品及复杂基质。