天津干细胞产品支原体检测方法学验证

抑制物质检测是支原体培养法的关键前置环节，旨在排除供试品中抑制成分对检测的干扰。湖州申科按 USP 标准执行：对供试品进行一次抑制物质检测，若生产方法发生变化可能影响支原体检测结果，需重复该检测。检测通过两组平行实验对比实现：一组培养基加入供试品，另一组不加供试品，同步开展营养特性测试，判断供试品是否含抑制物质。若检出抑制物质，需通过适当方法中和或抵消其作用，例如使用不含抑制剂的底物，或将供试品稀释在更大体积的培养基中，确保支原体能在检测体系中正常生长，避免因抑制成分导致检测结果失真。

质控结果是支原体 NAT 检测可靠性的前提，需严格遵循判定标准，且需结合实验室实际条件验证适配的标准阈值。质控样品的判定规则明确：NTC（无模板对照）的 FAM 信号需 2 复孔 Ct≥40 或无明显扩增曲线，VIC 信号需 2 复孔 Ct<35 且呈有效 “S” 型扩增；NCS（阴性对照）判定标准与 NTC 一致；PC（阳性质控）的 FAM 信号需 2 复孔 Ct<35 且呈有效 “S” 型扩增，PCS（阳性对照底物）判定标准与 PC 一致。只有质控结果全部满足要求，才能进一步分析样本结果，若质控不达标，需排查设备、试剂、操作等环节的问题并重新检测。

MycoSHENTEK^® 支原体 DNA 检测试剂盒参照 EP 2.6.7 和 JP XVII 支原体检测相关要求完成全面性能验证，是经过三方室间验证、性能完全符合药典标准的支原体检测试剂盒。该试剂盒检测灵敏度高达 10CFU/mL，可同时替代传统培养法与指示细胞培养法，大幅缩短检测周期。经实验验证，其对鸡滑液支原体、猪鼻支原体、莱氏无胆甾支原体等多种常见污染菌株的检出率均达到 100%（24/24），即使对口腔支原体等低浓度菌株，检出率也满足 95% 以上。凭借覆盖范围广、灵敏度高、性能稳定、合规性强的关键优势，该试剂盒为生物制品企业提供了高效、可靠的支原体检测工具，助力企业满足全球监管要求并保障产品质量。

菌株质量是支原体检测 NAT 方法验证合规的关键，GC/CFU 比（基因组拷贝数与菌落形成单位比值）是关键控制指标。支原体存在聚集特性，单一 CFU 可能对应多个菌体，且 DNA 复制与细胞分裂不同步，部分菌体无法形成菌落但会释放 DNA，导致 GC/CFU 比波动大（研究报道 0.1 CFU 对应 30-500 个基因组拷贝）。若使用高 GC/CFU 比菌株，会高估检测限、导致方法灵敏度不足，因此法规明确要求菌株 GC/CFU 比＜10。2024 年 EDQM 36.1 草案规定参考品 GC/CFU 比应小于 10，USP 77 征求意见稿要求表征菌株 GC/CFU 比、建立菌株库 CFU 与核酸拷贝数关系，JP G3-14-170 也对菌株质量提出明确要求，凸显合规菌株选择的重要性。

支原体检测培养法是生物制剂质量控制的关键环节，湖州申科提供的 USP 支原体培养法检测服务，严格遵循USP<63 mycoplasma tests（culture method）>标准，为生物制剂开发与生产提供可靠保障。该方法适用于检测组织或细胞培养物、消化肉液及其他疑似支原体污染的材料，是确保生物技术产品及生产用材料合规性的必要要求。检测周期约 29 天，流程需满足双重要求：每批次培养基必须进行营养特性测试，确保检测效能；供试品需完成抑制物质检测，若生产方法发生变化可能影响检测结果，需重复该测试，避免抑制成分干扰支原体检出，保障检测结果的准确性与可靠性。

MycoSHENTEK^® 支原体 DNA 校准品作为 NAT 检测的关键辅助试剂，采用质粒 DNA 制备，从根源上消除了污染风险，使用更安全。该校准品主要用于验证支原体 NAT 检测的灵敏度，以及校准品浓度对数与 Ct 值的线性关系，为检测方法的定量准确性提供保障。产品采用 DNA 稀释液进行系列梯度稀释，操作简便高效，无需复杂预处理；同时具备极强的专属性，不受其他种属 DNA 干扰，耐用性突出，可在不同实验条件下保持性能稳定。其标准化的特性使其成为生物制品企业开展支原体检测方法验证、日常质量控制校准的理想选择，助力检测结果的准确可靠。