浙江宿主细胞蛋白（HCP）残留检测免疫策略

湖州申科生物专注于提供契合严苛法规要求的宿主细胞蛋白（HCP）ELISA 检测试剂盒，主要目标是满足抗体药、疫苗等生物制品在 IND/BLA 申报阶段的监管标准。为实现这一目标，公司搭建了全流程依规开发的质量管控体系 —— 整个开发过程严格遵循 ISO 13485 质量标准，同时能充分满足用户审计需求，从体系层面保障产品合规性。其开发流程包含三大关键阶段，前两大基础阶段聚焦关键物料的品质把控：一是 HCP 残留定量检测参考品开发，重点是构建可靠的 HCP 抗原参考品，需完成抗原表征、量值溯源与赋值、均一性验证及稳定性考察等工作，为检测准确性与样品代表性奠定基础；二是高质量大批量抗体制备，通过优化的 HCP 抗原动物免疫策略，搭配严谨的抗体质量标准（含标准制定、覆盖率验证）与稳定的制备工艺，生产出高特异性、广覆盖度的检测抗体，确保后续检测的特异性与灵敏度。

各国法规要求对生物药品开展分析与纯化处理，以将宿主细胞蛋白（HCP）降至可接受水平；即便终产品中痕量 HCP 进入患者体内，目前仍不明确特定残留蛋白质杂质是否会对药物的稳定性或免疫原性产生影响。在 HCP 限量标准方面，美国药典推荐终产品 HCP 水平为 1-100 ng/mg；中国药典各论则明确，大肠杆菌（E.coli）菌体 HCP 需不高于蛋白质总量的 0.10%（即 1000 ng/mg），CHO 细胞 HCP 需不高于蛋白质总量的 0.05%（即 500 ng/mg），假单胞菌 HCP 需不高于蛋白质总量的 0.02%（即 200 ng/mg）。

宿主细胞蛋白（HCP）的来源中，常伴随核酸、胞膜脂类及培养基中的氨基酸等非HCP成分，这些成分会干扰总蛋白检测的准确性，因此在检测前需开展纯化前处理，同时对总蛋白检测方法实施方法学确认。HCP本身属于多蛋白混合物，不同总蛋白定量方法的检测结果会存在一定差异，这也是造成HCP免疫检测方法结果不一致的原因之一。若不同HCP蛋白定量方法的检测结果差异较大，通常需同时采用2种及以上经确认的方法进行检测，随后取平均值。总蛋白检测方法的定量限通常只能达到μg/mL级别，而HCP检测试剂盒的产品校准品浓度则处于ng/mL级别。将HCP高浓度原液稀释至低浓度产品校准品的过程中会产生稀释误差，因此需对产品校准品重新进行标定赋值。编辑分享用多种方法确认检测结果时，如何选择合适的方法组合？总蛋白检测定量限与HCP校准品浓度差异大的原因是什么？有哪些方法可以降低非HCP成分对检测的干扰？

湖州申科生物凭借自主可控的供应链与经严格验证的技术性能，确保 HCP 检测试剂盒的长期稳定供应及出色分析能力。一方面，公司实现关键物料自研自产：校准品通过冻干工艺大规模生产，能稳定储存 10 年以上；抗体经大动物免疫制备，产量可支撑≥10,000 盒试剂盒生产，确保同批次抗体连续供应超 10 年；试剂盒经多批次验证，批内与批间一致性表现良好。另一方面，所有产品均参照 ICH Q2（R2）及 ICH M10 法规要求完成验证：以大肠杆菌（E.coli）HCP 产品为例，其线性范围（1-243 ng/mL）的 R²>0.999，各浓度点回收率偏差≤5%；准确度处于 81.2%-111.6% 区间，中间精密度 CV 值为 5.7%-12.4%；定量限（LLOQ）低至 1.5 ng/mL，且对 CHO、HEK293 等多种宿主细胞的交叉反应均低于检测限。同时，借助二维电泳（检出 826 个蛋白点）与质谱法（鉴定 2204 个蛋白点）对校准品进行双重表征，并运用 IMBS-2D（覆盖率 > 70%）与 IMBS-MS（覆盖率 84.7%）正交技术验证抗体覆盖率，从源头保障检测结果的全面性与可靠性。

宿主细胞蛋白（HCP）多与细胞关键功能相关，例如细胞增殖、基因转录、蛋白合成修饰、细胞存活及凋亡等，在生产工艺中会因细胞分泌、死亡或裂解而释放。生产过程里，有三大因素主要影响 HCP 的组成与丰度：①宿主细胞基因组调控及培养工艺：特定工艺下，潜在 HCP 数量可能极多，且并非所有基因都会表达，部分基因的表达具有时间和条件特异性；像大肠杆菌约含 4300 个基因，不同工艺产物会经历独特的翻译后修饰，这增加了 HCP 的总数与生化复杂性。研究显示，大肠杆菌表达的蛋白间存在数量差异，这种差异可能是对环境条件的适应性反应，但 85-90% 具有潜在免疫原性的 HCP 在不同发酵过程中均会出现。②产物表达方式：宿主细胞与外源基因、载体及辅助成分构成的体系，可实现稳定、瞬时及诱导表达；以大肠杆菌为例，常见表达形式包括胞内表达、分泌表达、可溶性表达、不溶性包涵体形式，还有融合与非融合表达。③纯化步骤及产品自身特性的影响：纯化过程中能去除 99% 以上的 HCP，但仍有少量残留 HCP 留在产品中，这些残留 HCP 可能与产品结合，随产品一同被纯化。

LC-MS/MS 作为成熟稳定的蛋白质组学分析技术，依托超高分辨率与准确度，在生物分析领域中占据关键地位。该技术不仅可对低含量宿主细胞残留蛋白（HCP）开展定性检测，还能通过构建专属蛋白质谱库准确鉴定 HCP 的具体种类，为深度解析残留蛋白组成提供重要支撑。不过该技术应用中面临的主要挑战，是如何优化 LC-MS 方法以契合 GMP 规范对产品放行检测的严苛要求。在质谱检测环节，引入表征明确的内标与外标蛋白，可准确分析 HCPs 的整体组成，并有效识别其中具有潜在风险的高风险蛋白。这一技术手段不仅为开发产品专属 HCP ELISA 检测方法提供有力数据支撑，还可助力工艺优化升级，加快推进生物制品从研发到获批上市的全流程进度。