浙江Sf9宿主细胞蛋白（HCP）残留检测

宿主细胞蛋白（HCP）ELISA 定制化开发平台需具备完善的开发体系、可靠的技术平台与专业的开发团队，以此实现长期稳定供应符合法规要求的试剂盒。其中，校准品作为关键原材料，其良好的稳定性与溯源保障对试剂盒生命周期至关重要。为确保校准品稳定，通常采用冻干工艺制备，通过单因素方差分析方法评估其均一性，并依据法规规定的蛋白定量方法为校准品赋值，同时溯源至国家标准品（如有）或 BSA 国家标准品，从源头保障检测的准确性与合规性，为后续检测体系的可靠运行奠定基础。

影响宿主细胞蛋白（HCP）残留检测结果的因素之一是样品质量。HCP检测贯穿生物制品生产的全过程，涉及收获、纯化、制备等多个步骤。在不同样品基质下，HCP检测可能存在巨大差异。例如，对于含有佐剂的疫苗，由于佐剂的干扰，难以在成品中对HCP项目进行检测，因此一般在吸附工艺之前的原液阶段进行检测。此外样品的收集、处理和保存方式对检测结果至关重要。不正确的处理可能导致蛋白降解或变性，从而影响检测结果。例如，若采用历史批样品作为内部质控品，应结合其稳定性数据合理制定保存条件及保存期限，以保证检测方法的准确性和稳定性。

湖州申科生物依据不同宿主的实际生产工艺，借助高质量免疫原与HCP多抗的标准化制备流程，制备出高效价、高覆盖率的抗体，进而开发出SHENTEK^®HCP检测试剂盒：适配大肠杆菌表达菌（BL21）生产工艺及克隆菌碱裂法提取质粒工艺，以及适配CHO、MDCK、HEK293、Sf9、VERO、毕赤酵母等不同宿主，可用于中间品、原液及终产品的HCP定量监测。为保障ELISA法对HCP定量检测的准确性，需对HCP抗体覆盖率开展验证。湖州申科的抗体覆盖率平台，采用2D Clean-up试剂盒去除蛋白样品中的干扰物（如洗涤剂、盐、脂质、酚类、核酸等离子污染物），同时设置2D质控标准品实施严格质控，并以阴性抗体作为对照开展平行试验，以此提升结果准确度。

湖州申科生物推出的宿主细胞残留蛋白检测全自动 ELISA 分析系统，整合了标曲制备、样本加样、恒温孵育、板孔清洗及结果检测等全流程功能。系统搭载的高精度前处理模块与检测模块，通准确控制实验参数，有效减少人为操作误差，确保实验结果的稳定性与准确性。其多模块单独运行设计，可实现不同检测任务的并行处理，大幅缩短实验周期，明显提升整体实验效率。在保障结果可靠的基础上，该系统实现了 ELISA 实验的自动化操作、标准化流程与快速化输出，降低了对实验人员的技能要求，同时通过优化资源配置减少检测成本。此外，系统内置完善的数据管理功能，可满足实验数据完整性记录与全流程审计追踪需求，严格符合 21 CFR Part 11 法规要求，并配备三级权限管理机制，进一步保障实验数据的安全性与规范性。

宿主细胞蛋白（HCP）是生物制品中源自细胞基质的残留杂质，异质性特征明显。其复杂性主要体现在三方面：①理化特性差异：包含胞内与分泌蛋白（涉及关键生理功能），等电点（pI 3-11）、分子量（5-250kDa）及疏水性的区间跨度大；②上游工艺影响：不同发酵工艺（如细胞株选择、培养条件控制）会诱导独特的翻译后修饰（PTM），进而增加 HCP 的总量与生化复杂性；③下游工艺与产物特性干扰：抗体、细胞因子等重组蛋白或病毒类药物的纯化工艺，会选择性残留特定 HCP；同时，产物形式（如大肠杆菌的包涵体 / 可溶性表达）也会直接影响 HCP 的残留谱。针对特定生产工艺开发定制化检测方案，是准确监控 HCP 残留的关键所在。

宿主细胞蛋白（HCP）的来源中，常伴随核酸、胞膜脂类及培养基中的氨基酸等非HCP成分，这些成分会干扰总蛋白检测的准确性，因此在检测前需开展纯化前处理，同时对总蛋白检测方法实施方法学确认。HCP本身属于多蛋白混合物，不同总蛋白定量方法的检测结果会存在一定差异，这也是造成HCP免疫检测方法结果不一致的原因之一。若不同HCP蛋白定量方法的检测结果差异较大，通常需同时采用2种及以上经确认的方法进行检测，随后取平均值。总蛋白检测方法的定量限通常只能达到μg/mL级别，而HCP检测试剂盒的产品校准品浓度则处于ng/mL级别。将HCP高浓度原液稀释至低浓度产品校准品的过程中会产生稀释误差，因此需对产品校准品重新进行标定赋值。编辑分享用多种方法确认检测结果时，如何选择合适的方法组合？总蛋白检测定量限与HCP校准品浓度差异大的原因是什么？有哪些方法可以降低非HCP成分对检测的干扰？