广东工艺特异型宿主细胞蛋白（HCP）残留检测抗体制备

昆虫细胞杆状病毒表达系统（IC-BEVS）是以杆状病毒作为外源基因载体，以昆虫细胞作为宿主进行外源蛋白生产的真核表达系统。BVES具有易于规模化生产、培养成本低、生物安全性高等优势，近年来陆续被研究用于生产重组蛋白、rAAV载体、亚单位疫苗（如病毒样颗粒（VLP）疫苗）等， 在生物制品重组蛋白表达领域已有普遍运用。Sf9来源于草地夜蛾细胞系（Spodoptera frugiperda cell line，Sf），是目前较常用的昆虫细胞系之一。SHENTEK® Sf9 HCP残留蛋白检测试剂盒（一步酶联免疫吸附法），可定量检测使用Sf9细胞系生产的生物制品中宿主细胞蛋白的残留检测。试剂盒抗体覆盖率为70.4%-96.0%（IMBS-2D）和91.2% (IMBS-MS，Unique Peptide ≥2）。

目前通过Vero细胞培养的病毒有狂犬病病毒、脊髓灰质炎病毒等，种类繁多，工艺也各有千秋。湖州申科生物Vero细胞裂解型HCP残留检测试剂盒（一步酶联免疫吸附法）针对工艺过程中Vero细胞裂解后产生的大量不同种类的HCPs，可定量检测使用Vero细胞系生产并通过细胞裂解工艺收获的生物制品中宿主细胞蛋白的残留检测，抗体与校准品可覆盖近3000种蛋白。试剂盒操作简便，提高实验人员的时间利用率。试剂盒抗体覆盖率为65.1%-85.1%（IMBS-2D）和76.9%(IMBS-MS，Unique Peptide≥2）。试剂盒严格遵循ISO13485质量体系进行生产，并按照法规要求进行了性能验证，各项性能满足Vero宿主细胞蛋白检测需求。

影响宿主细胞蛋白（HCP）残留检测结果的因素之一是操作规范。一方面，实验人员的专业技能和经验对检测结果的准确性有很大影响。熟练的实验人员能够准确地进行样品处理、试剂配制和仪器操作，减少人为误差。另一方面，一个合理的HCP检测方法，在开发及应用时，应当考虑操作的合理变动区间（即耐用性）并设置相质控，从程序上尽量消除人为误差对结果的影响。此外，严格遵循标准操作流程（SOP）是确保检测结果可靠性的关键。操作步骤的不规范可能导致结果的重复性差或误差增大。目前，湖州申科已正式推出全自动化HCP ELISA检测系统，可以完成从样品制备、孵育、洗板至数据采集等一系列操作，结合实验室信息管理系统（LIMS），可以实现“输入即输出”，减少流程误差。

美国药典<1132>章节 和欧洲药典<2.6.34>章节建议对于即将进入商业化生产的（临床III期及以后）或生产工艺稳定的生物制品采用定制化ELISA试剂盒进行宿主细胞蛋白（HCP）残留检测，原因可能是：①确保检测方法可以充分覆盖实际工艺产生的HCPs，避免漏检关键杂质；②支持更准确的免疫原性和安全性评估；③提供真实的工艺表征数据，而非推测数据；④满足商业化生产质量控制的方法一致性。此外，对目前市场上常见的HCP ELISA商业化试剂盒进行了测试，并与HCP ELISA定制化试剂盒进行对比，实验结果发现不同商业化试剂盒检测同一样品的检测值差异大，且准确性均低于定制化试剂盒，表明定制化试剂盒更能满足产品质量控制所需。

为什么定制化试剂盒是宿主细胞蛋白残留检测的优先选择？原因之一是来源特定工艺下抗原及校准品更具代表性。不同生物制品的上游生产工艺，包括培养基，培养条件，收获时机等差异，均会导致产生的HCPs的蛋白种类、丰度以及蛋白翻译修饰不同，因此进入到下游纯化工艺的HCP类型也随之发生变化，尤其是与药物主成分共纯化的HCPs会成为优势蛋白而存在于药物原液或制剂中。HCP定制化ELISA检测试剂盒通常选取实际生产工艺中上游发酵后的样品进行抗原及校准品的制备，所制备的校准品可以较为充分地反映实际生产工艺中的HCP，减少因抗原校准品种类不足导致的漏检以及定量不准确的风险。

磷脂酶B样蛋白2（Phospholipase B-Like 2，PLBL2/PLBD2），因其强共纯化能力、强免疫原性和潜在的酶活性，被认为是CHO HCP的关键高风险因子之一。目前行业建议，需要开发特定的检测方法对这些已知蛋白或特定蛋白进行监控以更好地把控其潜在风险。SHENTEK^® CHO PLBL-2残留检测试剂盒（酶联免疫吸附法）是湖州申科生物自主研发的、具有完全自主知识产权的CHO PLBL-2蛋白通用检测试剂盒。本试剂盒适用于基于CHO表达系统的生物制品中CHO HCP高风险蛋白PLBL-2的定量检测。本试剂盒操作步骤少，快速，检测专一性强，性能稳定可靠。