广东原料药内毒素检测LER现象

湖州申科生物动态显色法鲎试剂用于定量测定人用和动物用注射药物、生物制品及医疗器械等样本中的细菌内毒素的含量。 细菌内毒素能特异性地活化反应主剂中的 C 因子，活化的 C 因子活化 B 因子，活化的 B 因子进而活化凝固酶原，凝固酶水解反应中的显色底物，产生游离的pNA（对硝基苯胺）从而引起吸光度变化，根据动态检测溶液吸光度变化率对内毒素进行定量。本品能够快速、高灵敏度地定量检测样品中的内毒素水平，适用于各种实验室和工业生产场景，确保产品质量和安全性。

内毒素检测方法易受样品基质干扰，法规要求在方法应用前必须进行干扰验证，选择标准曲线中点或一个靠近中点的内毒素浓度，作为供试品干扰试验种添加的内毒素浓度计算回收率，若回收率在 50%-200% 范围内，表明无明显干扰；若回收率异常，需通过过滤、中和、透析、加热处理等方式优化样品前处理。方法学确认还需涵盖线性范围（如 0.005-5 EU/mL）、精密度（批内 CV≤15%）、检测限（LOD≤0.01 EU/mL）等指标，确保方法在实际样品检测中稳定可靠，符合《美国药典》 <85>、《中国药典》通则 1143 等药典要求。

湖州申科重组级联试剂（rCR）在关键性能指标上表现优异，满足内毒素检测的严苛要求。灵敏度方面，其检测范围覆盖 0.005-5EU/mL，可准确捕捉微量内毒素残留，适配基因治疗、血液制品等低限值需求场景。标准曲线线性良好，R²≥0.990，确保定量结果的准确性。反应效率上，rCR 只需 60 分钟即可完成检测，较部分竞品的 90-120 分钟大幅缩短，提升检测周转效率。抗干扰性实验显示，对细胞培养辅料、300g/L 葡萄糖、FBS 血清、单抗等 8 类复杂样品，rCR 在较低稀释倍数下加标回收率可达 70%-175.4%，优于重组 C 因子法。批间一致性方面，多批次试剂检测同一样品的 CV 值≤15%，稳定性远超行业平均水平，为长期质控提供可靠保障。

随着动物保护理念和法规要求升级，重组因子C法（rFC法）作为 LAL 法的替代技术逐渐普及。重组 C 因子是以基因重组的方式表达的 LAL 试剂中的 C 因子，C 因子被内毒素活化后切割荧光底物产生游离荧光基团，通过检测荧光信号可以反应活化后的蛋白酶活性，并由此可以推算出内毒素的含量。与传统 LAL 法相比，rFC 法无需依赖鲎血资源，避免了天然 LAL 试剂批间差异大、易受 β- 葡聚糖干扰等问题，且反应特异性更强。目前，《美国药典》、《欧洲药典》等法规已收录 rFC 法，欧盟更推荐其用于疫苗等高风险产品检测，在保证检测准确性的同时，符合动物福利和可持续发展要求。

低内毒素回收（LER）与传统鲎试剂干扰（抑制 / 增强）在多维度存在差异，准确区分对优化内毒素检测至关重要。表现上，LER 是内毒素回收率＜50%，传统干扰是反应抑制或增强；成因上，LER 由螯合剂 + 表面活性剂协同或蛋白质电荷结合引发，传统干扰因 pH、β- 葡聚糖等导致；排除方式上，LER 时间依赖且无法稀释解决，传统干扰浓度依赖且可通过稀释缓解；确认方法上，LER 需通过保存时间研究（HTS），传统干扰按药典干扰实验评估。明确这些区别能帮助企业排查内毒素检测异常，避免误将 LER 当作普通干扰处理。

低内毒素回收（LER）又称内毒素掩蔽，是指无菌制剂（尤其蛋白类生物制剂）进行内毒素检测时，加标内毒素的回收率＜50% 的现象，且无法通过稀释排除，区别于传统检测干扰。LER 会导致内毒素污染被低估，已被全球监管机构重点关注：FDA 2013 年要求生物药 BLA 申报时提交 LER 研究报告；EMA 2023 年明确含表面活性剂（如吐温）或螯合剂（如 EDTA）的制剂需提供 LER 数据；中国药典 2025 版 9251 通则也新增 LER 内容，与国际接轨。这些要求促使企业优化内毒素检测流程，避免因 LER 导致的检测偏差，确保药品安全。