PyroSHENTEK®热原检测试剂盒以 “简化流程、提升效率” 为设计理念，采用即用型细胞，冻存细胞无需离心复苏培养，复融后可直接与供试品混合共孵育，大幅节省传统细胞预处理（如调整细胞状态、铺板培养）的时间成本。实验流程清晰可控：只需按要求制备待测供试品与内毒素工作标准品，各取对应体积加入细胞悬液（每孔加样量明确），经 37℃、5% CO₂孵育 24 小时后，离心收集上清并通过 ELISA 法检测 IL-6 含量，全程可在 24 小时内获得稳定可靠的检测结果。这种便捷性尤其适配实验室高通量检测需求，减少人员操作步骤的同时，降低了因复杂操作引入的误差风险，兼顾效率与准确性。
PBMC（外周血单个核细胞）用于 MAT 检测时供体差异大，IL-6 释放波动明显，标准化难度高于单核细胞系。合规性热原检测技术升级
MAT 法热原检测背景值偏高会干扰结果判读，需从试剂、操作两方面解决。试剂相关问题中，非特异性活化（如试剂含微量热原）会导致细胞异常分泌 IL-6，需选用低内毒素的试剂与耗材；检测试剂添加过多（如抗体浓度过高）会增加非特异性结合，需按说明书稀释试剂或降低推荐浓度。操作环节问题更多见：孔洗涤不充分会残留未结合抗体与酶，需按方案完成规定洗涤次数（如 3-5 次），确保洗涤液充分浸润孔底；洗涤缓冲液污染（如滋生微生物）会引入外源信号，需现配现用缓冲液；加终止液后读板延迟（超 10 分钟），会因黄色产物降解导致背景虚高，需加终止液后立即读板；底物孵育时见光会引发非特异性显色，需在避光环境下进行 TMB 孵育；孔板底部脏（如残留指纹、液体痕迹）会影响光吸收，需用无尘纸清洁孔板底部后再读板。通过以上措施，可有效降低背景值，确保检测信号的真实性，避免因背景干扰导致热原浓度误判。
北京生物制品热原检测结果判定单核细胞系传代可控，20代以内TLR表达与炎症因子分泌保持稳定，确保热原响应一致性。
传统细菌内毒素检查法（BET）只能检测革兰氏阴性菌的 LPS，无法识别革兰氏阳性菌 LTA、真菌酵母多糖、病毒鞭毛蛋白等非内毒素热原，存在漏检风险；同时，部分样品（如脂质体、表面活性剂制剂）会因内毒素吸附导致低内毒素回收（LER），BET法难以准确定量。MAT 法通过单核细胞表面的多种 TLR 受体（TLR1-TLR10），可识别不同类型热原：TLR4 识别 LPS、TLR2/TLR6 识别 LTA 与酵母多糖、TLR5 识别鞭毛蛋白、TLR3 识别病毒 dsRNA 等，实现 “全热原覆盖”。湖州申科生物热原检测试剂盒（MAT法）的验证数据显示，其对不同浓度非内毒素热原均有响应：如 0.1-100μg/mL 鞭毛蛋白可检测到 0.005-0.035EU/mL热原活性，0.1-10μg/mL LTA 对应 0.1-0.7EU/mL 热原活性，1-100μg/mL 雷西莫特（TLR7/8 配体）对应 0.5-3.0EU/mL 热原活性。此外，MAT法检测的是热原的生物活性（而非单纯 LPS 含量），可避免 LER 导致的假阴性，为CGT等高风险产品提供更有保障的热原检测方案。
含消除炎症成分的样品可能抑制 IL-6 产生，需通过科学评估排除干扰，确保 MAT 法热原检测结果准确。根据药典要求，若样品能抑制单核细胞促炎症因子释放，需通过以下步骤验证适用性：首先，选择样品 A、2A、4A 倍稀释（均不超过上限有效稀释倍数 MVD），避免高浓度消除炎症成分过度抑制；其次，进行供试品加标回收率实验，若回收率在 50%-200% 的合格范围，说明消除炎症成分未影响热原检测；再对比 “供试品配制的标曲” 与 “稀释液配制的标曲”，若两者 IL-6 检测值相差在 ±20% 以内，表明样品基质对检测无系统性干扰。例如，某消除炎症单抗样品经 2 倍稀释后，加标回收率达 120%，两种标曲 IL-6 值相差 15%，判定可适用 MAT 法。若出现回收率偏低（<50%），可尝试增加稀释倍数（如 8A 倍）或采用热灭活（若样品耐热）去除消除炎症活性；若仍无法排除干扰，需结合家兔法进行对比验证，避免因消除炎症成分导致假阴性。
MAT 法通过热原活化单核细胞 TLR 受体，释放 IL-6 等细胞因子，ELISA 检测 IL-6 推算热原含量。
湖州申科生物MAT试剂盒配套的即用型细胞，需严格遵循解冻与使用规范，避免细胞活性下降影响热原检测结果。首先，解冻操作需快速：从液氮罐或 - 80℃冰箱取出细胞后，立即放入 37℃水浴锅快速解冻（约 1-2 分钟），避免缓慢解冻导致细胞内形成冰晶，损伤细胞膜；解冻后需立即取出，用 75% 酒精擦拭管外壁消毒，防止污染。其次，细胞解冻后需一次性使用完毕，不建议按量添加培养基或添加剂后分次使用—即用型细胞经工艺优化，活性与浓度已预调，分次使用会导致细胞状态不均（如部分细胞活化、部分休眠），影响热原反应性。使用时需严格按说明书操作：将解冻后的细胞直接加入含样品的微孔板中，无需额外洗涤或稀释，若样品为高浓度基质，可提前用无热原培养基稀释样品（不超 MVD），但细胞不可稀释。此外，解冻后的细胞需在 30 分钟内完成加样，避免室温放置过久导致细胞活性下降，若无法及时加样，需置于 37℃培养箱暂存，但不超过 1 小时，确保细胞用于热原检测时处于较好的活性状态。
湖州申科MAT试剂盒适用于生物制品、化学制药、原料药、化妆品、医疗器械的热原检测。
热原检测合规申报MAT 法干扰试验需设 3 个样品浓度梯度（A、2A、4A 倍），均不超过MVD且加标回收合格。合规性热原检测技术升级
在 MAT 热原检测中，单核细胞系与 PBMC（外周血单个核细胞）的检测结果稳定性差异明显。实验结果数据显示，单核细胞系的标曲 R² 达 1.000，各浓度点 CV 值极低（如 ST1 为 0.92%、ST2 为 1.5%），相对偏差均在 5% 以内；而 PBMC 的标曲 R² 为 0.997，部分浓度点 CV 值超 20%（如 ST2 为 39.6%、ST6 为 45.5%），相对偏差高达 171.43%。这种差异源于两者对热原反应的一致性—单核细胞系能稳定释放 IL-6，PBMC 则因供体差异导致 IL-6 释放水平波动，直接影响热原检测结果的重复性，单核细胞系更适配准确的热原定量需求。
合规性热原检测技术升级
