上海原料药内毒素检测方法验证

当实验室更换内毒素检测方法或更换试剂供应商时，需进行方法比对与桥接验证。比对实验需选取至少 3批代表性样品，分别用新旧方法检测，计算结果相关性（如相关系数 R²≥0.95）和偏差（≤20%）。桥接验证还需评估新方法的特异性、灵敏度是否与旧方法一致，如确认对高风险样品（如含 β- 葡聚糖的样品）的抗干扰能力相当。若方法变更涉及法规申报产品，需将验证数据纳入申报资料，证明变更后方法仍能有效控制内毒素风险，符合 FDA、NMPA 等监管机构对方法变更的合规性要求。

内毒素检测重组级联试剂（rCR）在方法桥接方面具有明显优势，可大幅度降低实验室的转换成本。在设备兼容性上，rCR 无需额外采购新设备，完全适配天然鲎动态显色法现用的酶标仪（如 Molecular Devices、Tecan sunrise、Thermo MultiSkan ET 等品牌），支持 405nm 波长动态读数和 37℃恒温孵育。操作流程上，rCR 的样品处理、试剂混合、加样孵育等步骤与天然鲎试剂一致，实验室无需重新培训操作人员或修改 SOP。显色系统方面，rCR 沿用与天然试剂相同的 PNA 显色底物，通过黄色信号变化定量，检测原理和数据分析方法保持不变。这种高度兼容性使实验室能快速完成方法验证和切换，加速重组试剂的合规应用进程。

生物制品（如单抗、疫苗、重组蛋白）注射剂因直接进入人体，对细菌内毒素残留限值要求严苛（通常≤0.5 EU/mg 或更低），检测面临基质复杂、干扰物质多等挑战。样品中常见的蛋白质、螯合剂、表面活性剂等可能抑制或增强 LAL 反应，需通过预处理消除干扰：如采用稀释法降低基质浓度、添加中和剂（如 Mg²⁺）修复反应体系，或使用热灭活去除蛋白类干扰物。此外，生物制品生产全流程需进行内毒素监控，从细胞培养上清、纯化中间品到终产品均需检测，确保工艺去除内毒素的有效性，符合 ICH Q6B 等法规对 “关键质量属性” 的控制要求。

医疗器械（如输液器、注射器、植入式设备）若携带内毒素，可能通过血液、组织接触引发异常反应或炎症反应。其检测需遵循 “模拟临床使用” 原则：采用浸提液（如 0.9% 氯化钠溶液或注射用水）在 37℃±1℃下浸提器械表面内毒素，再通过 LAL 或 rFC 法检测浸提液。不同器械的内毒素限值差异明显：一次性输液器需≤0.5 EU/device，植入式心脏瓣膜则要求更严格（≤0.06 EU/device）。检测时需注意器械材质对浸提效率的影响，如塑料类器械可能吸附内毒素，需优化浸提时间（通常≥1 小时）或采用超声辅助提取，确保残留内毒素被充分检出。

内毒素检测方法验证需覆盖多项参数，确保方法可靠：线性范围需包含样品预期浓度（如 0.01-10 EU/mL），相关系数 R²≥0.98；准确度通过加标回收率评估，应在 50%-200% 范围内；精密度包括批内和批间精密度，CV 值均应≤15%；检测限（LOD）需低于产品限值的 1/2（如限值 0.5 EU/mL，LOD 应≤0.25 EU/mL）；专属性需证明无干扰物质影响（如 β- 葡聚糖、蛋白质不引发假阳性）。验证通过后，方法需经实验室负责人批准方可使用，且定期需进行一次回顾性验证，确认方法持续有效。

湖州申科针对 LER 提供多平台内毒素检测解决方案，适配不同成因的 LER 问题：一是鲎试剂配套增强剂，通过添加分散剂、过量二价阳离子，改善 LPS 聚集体状态，提升回收率；二是重组鲎试剂（rCR），无 G 因子干扰，完全模拟天然鲎级联反应，灵敏度达 0.005EU/mL，易与天然方法桥接；三是重组 C 因子（rFC），灵敏度 0.005-5EU/mL，性状稳定，适配特定基质；四是 单核细胞活化反应测定（MAT)法，通过检测 IL-6 覆盖全热原，不受 LPS 结构变化影响；五是质谱技术，验证基质残留对检测的干扰。多平台协同确保内毒素检测准确可靠。