液相色谱与气相色谱的比较
液相色谱所用基本概念:保留值、塔板数、塔板高度、分离度、选择性等与气相色谱一致。液相色谱所用基本理论:塔板理论与速率方程也与气相色谱基本一致,但由于在液相色谱中以液体代替气相色谱中气体作为流动相,而液体和气体的性质不相同。此外,液相色谱所用的仪器设备和操作条件也与气相色谱不同,所以,液相色谱与气相色谱有一定的差别。
主要有以下几力‘面:
①操作条件及应用范围不同
②液相色谱能完成难度较高的分离工作
③由于液体的扩散性比气体的小105倍,因此,溶质在液相中的传质速率慢,柱外效应就显得特别重要;而在气相色谱中,由色谱柱外区域引起的扩张可以忽略不计。
④液相色谱中,制备样品简单,回收样品也比较容易,而且回收是定量的,适合于大量制备,但液相色谱尚缺乏通用的检测器,一起比较复杂,价格昂贵。在实际应用中,这两种技术是相互补充的。
综上所述,液相色谱具有柱效高,选择性高,灵敏性**析速度快,重复性好,应用范围广等优点,该法已成为现代分析技术的主要手段之一。目前在化学,化工,医药,生化,环保,农业等科学领域获得***的应用。
使用系统的主动预加热功能,以避免来自温度效应的性能损耗,确保进入色谱柱内的溶剂与色谱柱温度匹配。湖南进口高效液相色谱系统优惠价格
赛默飞高效液相色谱业务副总裁兼总经理Fraser McLeod表示:“在整个生物制药的流程中,从药物研发到质控的批次放行,数据完整性对于决策是必不可少的。为快速获取可靠结果,灵敏度和通量非常关键。我们开发出的这套系统展示出在复杂分析应用时的**辨分离和重复性。”
• Vanquish Flex UHPLC系统采用独特设计,即便在高通量的情况下,仍可以保证分析物色谱峰拥有尖锐峰形,实现在较短时间内分析更多样品。该系统良好的稳定性和重复性为数据质量提供了可靠保障,确保能够分析大量的样品,以供质控分析比较。其重要特点如下:
• 新型四元梯度泵模块,设计稳健,性能良好,保证高通量的前提下依然可提供方法开发的灵活性。
• 泵比较大耐压 1000 bar,性能***,流速高达 8 mL/min,应用灵活,可实现**辨分离。
• 新型荧光检测器模块灵敏度高,与高灵敏度、宽线性范围的UV、DAD检测器和针对非挥发性化合物的电雾式检测器互为补充。
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高效液相色谱分离原理
液-液分配
(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化学键合相色谱(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流动相和固定相都是液体。流动相与固定相之间应互不相溶(极性不同,避免固定液流失),有一个明显的分界面。当试样进入色谱柱,溶质在两相间进行分配。达到平衡时,服从于高效液相色谱计算公式:
式中,cs—溶质在固定相中浓度;cm—溶质在流动相中的浓度; Vs—固定相的体积;Vm—流动相的体积。LLPC与GPC有相似之处,即分离的顺序取决于K,K大的组分保留值大;但也有不同之处,GPC中,流动相对K影响不大,LLPC流动相对K影响较大。
a.正相液-液分配色谱法(Normal Phase liquid Chromatography): 流动相的极性小于固定液的极性。
b.反相液-液分配色谱法(Reverse Phase liquid Chromatography): 流动相的极性大于固定液的极性。
c.液-液分配色谱法的缺点:尽管流动相与固定相的极性要求完全不同,但固定液在流动相中仍有微量溶解;流动相通过色谱柱时的机械冲击力,会造成固定液流失。上世纪70年代末发展的化学键合固定相(见后),可克服上述缺点。
高效液相色谱相关术语
峰面积(peak area,A)—峰与峰底所包围的面积。
保留时间(retention time,tR)——从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。
理论塔板数(theoretical plate number,N)——用于定量表示色谱柱的分离效率(简称柱效)。
分离度(resolution,R)——相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值。也叫分辨率,表示相邻两峰的分离程度。R≥1.5称为完全分离。
《中国药典》规定R应大于1.5。
拖尾因子(tailing factor,T)——T=,用以衡量色谱峰的对称性。也称为对称因子(symmetry factor)或不对称因子(asymmetry factor)。
《中国药典》规定T应为0.95~1.05。
T1.05为拖尾峰。
Vanquish 系统柱箱 H 模块的双恒温模式,确保柱温始终恒定。高效液相色谱相关术语
色谱图(chromatogram)——样品流经色谱柱和检测器,所得到的信号-时间曲线,又称色谱流出曲线(elution profile)。
基线(base line)——经流动相冲洗,柱与流动相达到平衡后,检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。
噪音(noise)——基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。
漂移(drift)——基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起,柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。
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Vanquish Duo 系统可采用多种分析检测器,包括质谱(MS)、二极管阵列检测(DAD)、电雾式检(CAD)、可变波长检测(VWD)和荧光检测(FLD)。
多功能检测性能
从小分子到复杂生物大分子,根据分析物的分子特征不同,需要采用多种检测器。
双LC的Vanquish Duo系统可同时采用MS、DAD、VWD、FLD 和 CAD 等大量检测器产品中的任意两种检测器。
多功能色谱柱管理
更大的色谱柱容量(每个柱温箱内安装两个 30 cm 色谱柱或多个更短的色谱柱)以及**的温度范围和温度稳
定性。
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