培养基的灭菌:一般培养基可采用121°C高压蒸汽灭菌15分钟的方法。在各种培养基制备方法中,如无特殊规定,即可用此法灭菌。某些热敏成分,如糖类,应另行配成20%或更高的浓液,以过滤或间歇灭菌法消毒,以后再用无菌操作技术、定量加于培养基。明胶培养基亦应用较低温度灭菌。血液、体液和等则应以无菌操作技术抽取和加入于经冷却约50°C左右的培养基中。琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出,冷至55℃-60℃时,摆置成适当斜面,待其自然凝固。制备培养基的操作要点:固体培养基在液体培养基中加入适量的凝固剂即成固体培养基。福建自动搅拌培养基制备器
培养基(Medium)是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等,有点还添加克菌素、色素、和血清。为方便长期保管,培养基的成分均制成粉末状。使用时再配制成可用的培养基,整个制备过程培养基需要严格的灭菌。目前对培养基灭菌通常使用高压蒸汽法,因为蒸汽具有很强的穿透能力,能够杀死各种微生物,微生物受热死亡的原因,主要是因高温使微生物体内的一些重要蛋白质,如酶等,发生凝固、变性,从而导致微生物无法生存而死。灭菌中加热温度和受热时间与灭菌程度和营养成分的破坏都有关系。福建自动搅拌培养基制备器培养基制备器是供微生物、植物、动物组织和细菌生长和维持生长用的人工配置的养料。
培养基的类别按照培养基的物理状态分:培养基按其物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类。(1)古体培养基。是在培养基中加入凝固剂,有琼脂、明胶、硅胶等。古体培养基常月于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面。(2)液体培养基。液体培养基中不加任何凝固剂。这种培养基的成分均匀,微生物能充按标准中规定的培养时间和温度对接种后的平板进行培养,目标菌应呈现良好生长,并有典型的菌落外观、大小和形态,非目标菌应是微弱生长或无生长。
配制培养基应遵循的几个原则:1、目的明确:培养不同的微生物必须采用不同的培养条件;培养目的不同,原料的选择和配比不同;2、营养协调:微生物细胞组成元素的调查或分析,是设计培养基时的重要参考依据,微生物细胞内各种成分间有一较稳定的比例。3、理化适宜:指培养基的pH值、渗透压、水活度和氧化还原电势等物理化学条件较为适宜。4、经济节约:配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成份,特别是在发酵工业中,以降低生产成本。一般液体培养基可用滤纸过滤法,滤纸应拆叠成折扇成漏斗形。
实验室在制作培养基时候的经验总结:培养基分装:培养基的分装,应按使用的目的和要求,分装于试管、烧瓶等适当容器内。分装量不得超过容器装盛量的2/3。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵,其外还须用防水纸包扎(现试管一般多有用螺旋盖者)。分装时较好能使用半自动或电动的定量分装器。分装琼脂斜面培养基时,分装量应以能形成2/3底层和1/3斜面的量为恰当。分装容器应预先清洗干净并经干烤消毒,以利于培养基的彻底灭菌。每批培养基应另外分装20ml培养基于一小玻璃瓶中,随该批培养基同时灭菌,以为测定该批培养基较终pH之用。平板培养基要除去冷凝水,否则将影响平板分离培养效果。福建自动搅拌培养基制备器
全自动培养基制备仪主要特点:不会产生气泡。福建自动搅拌培养基制备器
利用三角培养瓶制备培养基:包扎,分装好后,塞上棉塞,在用牛皮纸将棉塞包裹好,防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。灭菌,按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高,营养成分会被破坏,培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。摆斜面,灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放,使其凝固成为一个斜面,约占试管长度的1/2。贮存,培养基在30℃下放置,无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。培养基是细胞生长的必需营养物质,利用三角培养瓶制备培养基可按照以上步骤操作,在使用前需确保培养基的无菌性,以免影响细胞正常繁殖。福建自动搅拌培养基制备器
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