微生物检验培养基制备的要点:培养基摆斜面,灭菌完成后,将试管中的中海琼脂培养基放在木棒或玻璃棒上,同时它很热,并且有适当的坡度。冷却后使琼脂凝固并变成斜面。斜面长度不超过试管的二分之一。微生物培养基质检,检验培养基灭菌后,发现有破损,浸水,颜色异常,棉塞被培养基污染。所有这些都必须丢弃,不能重复使用,并确定其很终pH值。无菌检查和效果检查也是必需的。无菌检查是取1~2瓶无菌培养基,37℃孵育一两天,确认无细菌生长;效果检查是将标准菌株接种到相关培养基上进行细菌检查。动物的生长、形态和生化条件与已知条件一致。两个条件都合格,准备好的培养基就可以使用了。液体培养基,80%~90%是水,其中配有可溶性的或不溶性的营养成分的培养基。中国台湾进口培养基制备器
培养基配制:配制用水,培养基的大部分是水,所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准,水的电阻应为200万欧姆,一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。培养基:培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基,以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)调pH至7.2-7.4,若pH值超过7.6或远低于6.8,则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌,使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。血清:培养中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高压灭菌,无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体,置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定,一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制,可选用无血清培养基。中国台湾进口培养基制备器全自动培养基制备仪主要特点:力搅拌,确保培养基受热均匀,营养均一。
培养基(Medium)是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等,有点还添加克菌素、色素、和血清。为方便长期保管,培养基的成分均制成粉末状。使用时再配制成可用的培养基,整个制备过程培养基需要严格的灭菌。目前对培养基灭菌通常使用高压蒸汽法,因为蒸汽具有很强的穿透能力,能够杀死各种微生物,微生物受热死亡的原因,主要是因高温使微生物体内的一些重要蛋白质,如酶等,发生凝固、变性,从而导致微生物无法生存而死。灭菌中加热温度和受热时间与灭菌程度和营养成分的破坏都有关系。
在制备培养基的过程中,首先要使用一些玻璃器皿,如试管、三角瓶、培养皿、烧杯和吸管等。这些器皿在使用前都要根据不同的情况,经过一定的处理,洗刷干净。有的还要进行包装,经过灭菌等准备就绪后,才能使用。新购的玻璃器皿:除去包装沾染的污垢后,先用热肥皂水刷洗,流水冲净,再浸泡于1~2%的工业盐酸中数小时,使游离的碱性物质除去,再以流水冲净。对容量较大的器皿,如大烧瓶、量筒等,洗净后注入浓盐酸少许,转动容器使其内部表面均沾有盐酸,数分钟后倾去盐酸,再以流水冲净,倒置于洗涤架上将水空干,即可使用。全自动培养基制备仪主要特点:保证细菌不被引入容器中。
天然培养基的血清种类:牛血清分为小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。显然,胎牛血清是品质很高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分很少。血清的主要成分血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。一般培养基在受热、吸潮后,易被细菌污染或分解变质,因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。中国台湾进口培养基制备器
培养基制备器必须附有该批培养基制备记录副页或明显标签。中国台湾进口培养基制备器
配制培养基需要哪些制备:(1)称出规定数量的琼脂和蔗糖,加水直到培养基较终容积的34,加热溶解,完全融解后的溶液是透明的。在配制液体培养基(不加琼脂)时无需加热。(2)按需要加入一定量的各种贮存母液,包括生长调节物质和其他特殊附加物。吸取母液要使用专一的移液管。如有必要,培养基中所需的维生素,可在高压灭菌之后通过减压过滤装置或微孔过滤器灭菌后再加入。(3)蒸馏水定容。充分混合后调节培养基的pH,一般以5.66.0为好。(4)培养基分装,分装量一般以占培养容器的1514为宜。之后在24h内完成高压灭菌,也可以高压灭菌后再进行培养基的无菌分装,室温下存放备用。暂时不用的培养基应放置于10摄氏度下保存,而含有生长调节物质的培养基在45摄氏度保存更佳。中国台湾进口培养基制备器
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