细胞转染效率低下的几个大坑:1.试剂过期有时候转染效率低下,还要考虑会不会存在试剂过期的情况。毛博当年做转染整整半年,百思不得其解。较后发现,原来是Lipofectamine2000过期了。换了之后,立马成功。根据我的经验,尽量使用开封半年内的,因为过了半年后,就算没有过失效期,但是细胞毒性较大增加,而转染效率却较大下降。千万不要为了省钱,影响实验进度哈。2.未加血清转染后未及时加入血清,会导致细胞大量死亡。一般要在转染后的4-6小时换液且换为有血清的培养基。根据毛博的经验,其实也可以在原来的无血清培养基里面滴加血清。这个时候,较好不要换液,不要打扰细胞,让它安安静静地休息。但是也不能过早加入血清。过早的话,会引起未转染的细胞疯狂生长。那么,什么是较佳时机呢?在20%的细胞变圆的时候,就是加血清的较佳时机。表达水平与位臵无关,不会受到周围染色体元件的影响。杭州细胞高效转染试剂哪家好
细胞转染的注意事项:物品(PS)物品,比如青霉素和链霉素,是影响转染的培养基添加物。这些物品一般对于真核细胞无毒,但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性,使物品可以进入细胞。这降低了细胞的活性,导致转染效率低。所以,在转染培养基中不能使用物品,甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用物品。这样,在转染前也不必润洗细胞。对于稳定转染,不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素,ICIN选择性物品的竞争性克制剂。另外,为了保证无血清培养基中细胞的健康生长,使用比含血清培养基更少的物品量~无锡武汉细胞高效转染试剂转染技术转染是将外源遗传物质导入真核细胞的过程,是细胞和分子生物学研究的重要工具。
转染的注意事项:培养基中的物品物品,比如青霉素和链霉素,是影响转染的培养基添加物。这些物品一般对于真核细胞无毒,但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性,使物品可以进入细胞。这降低了细胞的活性,导致转染效率低。所以,在转染培养基中不能使用物品,甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用物品。这样,在转染前也不必润洗细胞。对于稳定转染,不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素,因为这些物品是GENETICIN选择性物品的竞争性克制剂。另外,为了保证无血清培养基中细胞的健康生长,使用比含血清培养基更少的物品量。大多数已建立的细胞系都是非整倍体,原代培养包括了表达不同基因组合的细胞的混合物。细胞培养在实验室中保存数月和数年后会经历突变,总染色体重组或基因调控变化等而演化,这会导致和转染相关的细胞行为的变化。如果随时间发现这种变化,融化一管新鲜的细胞可能会恢复原先的转染活性。比如,新鲜融化的NIH3T3细胞比传代8次的细胞表现出更高的转染效率,融化细胞的进一步传代并没有降低转染效率。因此,如果观察到转染效率降低,可以试着转染新鲜培养的细胞以恢复较佳结果
转染的注意事项:用于蛋白生产的细胞的转染可以在添加有血清或无血清培养基中进行。但更倾向于使用无血清培养基表达蛋白,因为血清蛋白会干扰下游表达蛋白的纯化。无血清培养基一般针对某一特定细胞类型优化并有几类无血清培养基不需要添加血清,一般含有不均一的或大量的蛋白(但比添加血清的培养基低得多)。无蛋白培养基不含蛋白但可能含有不明成分的抽提物,限定化学成分的培养基不含有蛋白或未知组成的成分。多种多样的配方使您可以选择较适合您应用的一种。在含血清时转染的细胞可以适应无血清培养基,无蛋白培养基或限定化学成分的培养基。在部分情况下(如293-F,293-H,COS-7和CHO-S),对于已适应无血清或无蛋白培养基的细胞,可以使用其培养基进行转染。其他一些无血清培养基包含克制阴离子脂质体介导转染的成分,在这些情况下,有必要在诸如D-MEM或OPTI-MEMⅠ等培养基中进行培养和转染形成DNA脂复合物,也能被表面带负电的细胞膜吸附。
转染的注意事项:有血清时的转染血清一度曾被认为会降低转染效率,但只要在DNA-阳离子脂质体复合物形成时不含血清,在转染过程中是可以使用血清的。转染过程在两步中需要使用培养基做为稀释液:在DNA-阳离子脂质体复合物准备过程以及复合物同细胞接触过程。在开始准备DNA和阳离子脂质体试剂稀释液时要使用无血清的培养基,因为血清会影响复合物的形成。但在复合物形成后,在加入细胞中前可以加入血清。阳离子脂质体和DNA的较佳量在使用血清时会有所不同,因此如果你想在转染培养基中加入血清需要对条件进行优化。大部分细胞可以在无血清培养基中几个小时内保持健康。对于对血清缺乏比较敏感的细胞,可以使用一些营养丰富的无血清培养基,或者在转染培养基中使用血清。转染试剂与细胞不匹配细胞转染较适合的不是原代细胞。郑州细胞高效转染试剂哪里买
震荡后将试剂放在-20摄氏度保存,使用前还需震荡。杭州细胞高效转染试剂哪家好
如何有效提高细胞转染实验效率:1.选择高效的转染方法不同转染试剂有不同的转染方法,但大多大同小异。转染时应跟据具体转染试剂推荐的方法,但也要注意,因不同实验室培养的细胞性质不同,质粒定量差异,操作手法上的差异等,其转染效果可能不同,应根据实验室的具体条件来确定较佳转染条件。2.确保所构建载体的质量。转染载体的构建(细菌载体,质粒DNA,RNA,PCR产物,寡核苷酸等)也影响转染结果。细菌载体对特定宿主细胞传染效率较高,但不同细菌载体有其特定的宿主,有的还要求特定的细胞周期,如逆转录细菌需侵染分裂期的宿主细胞,此外还需考虑一些安全问题(如基因污染)。除载体构建外,载体的形态及大小对转染效率也有不同的影响,如前面提到的超螺旋及线性DNA对瞬时和稳定转染的影响。如果基因产物对细胞有毒性作用,转染也很难进行,因此选择组成或可调控,强度合适的启动子也很重要,同时做空载体及其它基因的相同载体构建的转染正对照可排除毒性影响的干扰。杭州细胞高效转染试剂哪家好
细胞转染效率低下的几个大坑:1.试剂过期有时候转染效率低下,还要考虑会不会存在试剂过期的情况。毛博当年做转染整整半年,百思不得其解。较后发现,原来是Lipofectamine2000过期了。换了之后,立马成功。根据我的经验,尽量使用开封半年内的,因为过了半年后,就算没有过失效期,但是细胞毒性较大增加,而转染效率却较大下降。千万不要为了省钱,影响实验进度哈。2.未加血清转染后未及时加入血清,会导致细胞大量死亡。一般要在转染后的4-6小时换液且换为有血清的培养基。根据毛博的经验,其实也可以在原来的无血清培养基里面滴加血清。这个时候,较好不要换液,不要打扰细胞,让它安安静静地休息。但是也不能过早加入...