RNA的提取:众所周知,Trizol是一种RNA提取试剂,内含异硫氰酸胍和酚等物质,能迅速破碎细胞和溶解细胞中的其他成分,压制细胞释放出核酸酶,维持细胞中RNA的稳定性,我们可以在反应物中加入Trizol后摇匀,在加入氯仿离心,这样的话我们的RNA就进入了水相中,再用异丙醇沉淀水相中的RNA,即可达到提取总RNA的目的了。首先我们需要称取一定量的预处理好的废酵母配10%左右的酵母溶液,在一定温度下,加入一定浓度的氯化钠,之后加入NaOH溶液调节反应的pH,搅拌抽提一定时间后,离心分离上清液,调节pH至等电点,经酒精沉淀获得核糖核酸,用水定容至100mL取1m适当稀释,调pH7.0,这样的话RNA就出现了,分别测定吸光值A260和A280并计算A260/A280,就可以测定RNA的提取率了。当然啦,我们还可以进行深入研究,如测定Nacl的浓度,PH的大小,以及抽提时间对RNA提取率的影响啦。拭子RNA提取试剂的选择?对离心柱法而言,拭子核酸得率的高低。南京RNA提取试剂厂家推荐

RNA提取醇沉淀不是越多就越好。有些实验方案会推荐,在异丙醇沉淀后,用乙醇沉淀两次。实际上,任何提取实验,都会在纯度和得率这一对矛盾中取舍。醇沉淀会将脂溶性杂质去掉,但部分非脂溶性的杂质依然会连同RNA一起被沉淀下来。因此,多整几次,并不会让RNA的纯度翻倍,反而还会有降低得率的风险。一般情况下,异丙醇和乙醇各沉淀一次即可。但是,倘若预计RNA浓度很低,那就只能放弃纯度,在低温沉淀数小时,以换来较高的得率。围绕DEPC的玄学。许多实验方案会推荐使用0.1%DEPC处理RNA相关用水,以灭活RNase。这一点是要肯定的。不过,在使用DEPC的过程中,又充斥着一些玄学。高压灭菌后的DEPC水,会有一股“香甜”的味道。许多人会以为那是残留的DEPC而不敢用。实际上,这只是DEPC分解成CO2和乙醇后,产生的一些挥发性酯类副产物。南京RNA提取试剂厂家推荐RNase主要来自样品的细胞。

酵母总RNA快速提取试剂盒(离心柱型):一、原理简介。改进的异硫氰酸胍/酚一步法裂解细胞和灭活RNA酶,然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,较后低盐的RNasefreewater将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。二、试剂盒特点:1、离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界有名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。2、结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好,纯度高和离心柱方便快捷的优点,不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程,RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。3、独有的RL裂解液配方,可以有效的消除基因组污染。4、多次漂洗去蛋白过程,提取RNA纯度更高。5、有效的去除了无用的5S在总RNA中含量,提高了纯度~
植物RNA提取:植物组织中,富含酚类化合物,或富含多糖,或含有某些尚无法确定的次级代谢产物,或RNase的活性较高。这些物质在细胞裂解后与RNA紧密结合形成难溶复合物或者胶状沉淀,很难将其去除。所以我们在提取植物组织时,要选取针对植物的试剂盒,试剂盒里的裂解液能有效解决多酚易氧化、多糖化合物与核酸分离等难题。1、植物的果皮、果肉、种子、叶片等要在研钵中充分研磨,研磨过程中液氮要及时补充,避免样品融化,研磨后的样品应迅速加入裂解液中震荡混匀,避免RNA降解。2、像水稻及小麦叶片等富含纤维的样本,则应适当减少提取用量,否则组织研磨及裂解不彻底,会使提取的RNA产量较低。3、含水分较多的植物组织例如石榴果实、西瓜果实、桃子果实等则应当适当提高样本量(可选100~200mg)。4、植物组织,如植物叶片、根茎、坚硬的果实等材料一般建议使用液氮在研钵中彻底研钵成份,再继续进行提取步骤。常规的组织匀浆机对植物组织的匀浆效果可能不佳,一般不建议使用。细胞质和细胞核RNA提取试剂盒特点:试剂盒不含苯酚,可提取所有RNA。

法尔和梅洛的发现。科学家在矮牵牛花实验中所观察到的奇怪现象,其实是因为生物体内某种特定基因“沉默”了。导致基因“沉默”的机制就是RNA干扰机制。此前,RNA分子只是被当作从DNA(脱氧核糖核酸)到蛋白质的“中间人”、将遗传信息从“蓝图”传到“工人”手中的“信使”。但法尔和梅洛的研究让人们认识到,RNA作用不可小视,它可以使特定基因开启、关闭、更活跃或更不活跃,从而影响生物的体型和发育等。诺贝尔奖评审会在评价法尔和梅洛的研究成果时说:“他们的发现能解释许多令人困惑、相互矛盾的实验观察结果,并揭示了控制遗传信息流动的自然机制。这开启了一个新的研究领域。”研钵150度烘烤4小时,离心管、吸头用DEPC处理。太原正规RNA提取试剂直销价
血浆/血清RNA提取试剂盒:总RNA吸附柱保证RNA提取速度快,提取效率高。南京RNA提取试剂厂家推荐
细胞RNA提取的方法:实验提取步骤:标准Trizol提取步骤为液氮研磨--加入Trizol裂解--加入氯仿抽提--离心--加入氯丙醇沉淀--离心--酒精洗涤--离心。将细胞培养皿置于冰上,加入Trizol裂解5-10分钟,用泵头轻轻吹打后吸取液体放入进口EP管中。加入1/5体积的氯仿,上下混匀液体,4度静置10-15分钟。(氯仿为有机溶剂,有效的使有机相和无机相迅速分离。有机相中主要是酚和蛋白结合,从而使得蛋白和RNA脱离,RNA进入水相)。4度离心15分钟,一定注意选择低温离心。离心后分成三层,RNA在上清里,从离心机轻轻拿出EP管,以免管内物质震荡导致下层沉淀激起。吸取上清的时候一定要动作轻柔,切忌吸取太多,一般吸到400-500ul,避免吸到下层沉淀,将液体置于新的EP管中。加入等体积异丙醇,4度静置10min,然后12000rpm离心10min。南京RNA提取试剂厂家推荐
RNA稳定方法:1.在裂解缓冲液中立即溶解,使RNase失活。然后样品可以立即处理或冷冻保存。2.浸泡在稳定试剂中(如DNA/RNAShield),使核酸酶失活,并在环境温度下长时间保护核酸。这对正在实地收集样本或处理珍贵的病人样本(例如组织活检、全血等)的研究人员特别有帮助。确保样品完全溶解:在RNA提取过程中,较大限度地提高RNA产量和质量的较佳方法是保证样品的完全裂解。然而,并不是所有的样本都对相同的裂解方案敏感。例如,血细胞(如淋巴细胞、PBMCs等)和微生物细胞往往更难以有效地溶解。光光添加基于洗涤剂的裂解缓冲液可能并不总是足够的。为了提高裂解效果,可以将裂解缓冲液与机械裂解步骤(研...