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细胞培养注意事项及常见问题解答：1、培养基的选择依细胞种类而定。如果是从别的实验室借来的细胞，较初阶段一定要保持细胞原有的培养条件；特殊种类的细胞，比如内皮细胞，可以借鉴网上培养成功的条件，添加一些特定成分。2、液体培养基的保存条件应是冰箱4度冷藏。小六儿见过有的大实验室细胞量多，一次性购买的培养基瓶数也多，有些人可能觉得-20冰箱保存时间会更久一些。但是经过冷冻后的培养基再溶化时，你会发现培养基的颜色发生变化，颜色变深，这就是培养基的PH值升高了。3、培养基中都含有大量的谷氨酰胺，用来合成细胞生长所需要的核酸和蛋白质。但是谷氨酰胺在溶液中不稳定，保存4周后的培养基需要重新加入谷氨酰胺。所以尽量不要大批量购买培养，也不要一次配太多的培养基。它们产生的有毒物质会影响原代细胞的生长。重庆原代细胞分离试剂盒进货价

原代细胞标准化培养：由于每种原代细胞培养的条件迥异，而且每个实验室都摸索出自己的培养条件，而对于一个特定的组织块，所用培养条件不一样，得出的所需细胞族群就不一样，因为每种组织块都含有不同种类的细胞群，而每一种细胞群在所选定的培养条件下（比如所选蛋白分解酶的种类和条件，细胞因子的种类，基础培养基的种类或者是培养时间长短）都会得出不同的结果。由于各实验室采取不同的培养条件，即使是同一块心组织就有可能造成A实验室获得30%的心肌细胞，70%其他种类细胞，而B实验室却能获得70%所需心肌细胞，30%为成纤维、脂肪等种类。这样的话，即使是做同一项目的实验，就有可能得出相反的科学结论。成都原代细胞分离试剂盒使细胞得以生存、生长和繁殖(注意整个过程无菌)。

原代细胞的培养和维持：1.消化培养法2.悬浮细胞培养法对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。3.部位培养部位培养是指从供体取得部位或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，部位培养可保持部位组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。

原代细胞的培养与建系细胞的来源多样，培养方法也各不相同，凡是来源于胚胎、组织部位及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。原代细胞经分散接种之手段称为传代。凡能经传代方式进行再次培养的细胞称为传代细胞。若能稳定生长传至10~20代以上的细胞可确立为细胞系。若有条件能开展单细胞克隆、纯化，经大量扩增后所形成的生物学特性稳定的克隆化细胞群，称之为细胞株或克隆细胞。此过程称为细胞的纯化或细胞克隆。这些基本技术是从事细胞培养工作的基础，只有熟悉和掌握了基本技术,才可能更快捷地学习和掌握其他方法,本章重点叙述常用的基本技术。靠前节原代细胞的取材人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，是进行细胞培养的靠前步，若取材不当，将会直接影响细胞的体外培养。应用于大规模药物筛选，越来越多地用于更可靠地研究生命科学。

胶原酶的配制：建议看相关的文献进行胶原酶的配制。小编常用的是DMEM进行配制，配制好的胶原酶消化液放置在37℃水浴锅内预热（注意现用现配）。胰酶（酶联合法获取原代细胞中会加入胰酶，相关文章也蛮多的）胶原酶消化时间：根据组织特性，消化时间会有差异。以小鼠肾细胞为例，加入胶原酶Ⅰ进行消化后，放入37℃培养箱中消化45min~1h左右，期间每10min中震荡一次，知道组织块几乎完全消失为止（若是组织块剪得非常细小，时间可以短一些，30min左右即可）。原代细胞的获取：酶消化法：所用试剂：胶原酶和胰酶会极大提高原代培养的细胞在体外存活率。成都原代细胞分离试剂盒进货价

多数细胞推荐的接种密度为每平方厘米5000个细胞。重庆原代细胞分离试剂盒进货价

使用RFect系列小核酸转染试剂做siRNA/miRNA转染测实验注意事项：1.细胞接种：一般做转染前现在接种/铺板（细胞计数大约5*10^4cell/ml），使做转染前细胞密度在30-50%；如果细胞是原代细胞，接种密度可以密一些，细胞计数在2*10^6cell/ml；悬浮细胞可以在转染当天接种/铺板（细胞计数大约5*10^4cell/ml），待细胞状态稳定后做转染前细胞密度30-40%。2.为了能在使用时有较好的转染效果，靠前次使用建议您用24孔板做，每孔2ul转染试剂即可。将较佳转染条件（siRNA与转染试剂的用量、比例）放大到对应的孔板即可。重庆原代细胞分离试剂盒进货价