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细胞电转染实验的几点建议：1.电场强度要合适合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的较佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的较佳电场强度。2.细胞状态要好用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2d）。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛，表面结构致密比稳定期的细胞差，电转后，细胞膜的恢复能力强，而且处于有丝分裂期的细胞更容易接受外源DNA总染色体重组或基因调控变化等而演化。贵阳正规细胞高效转染试剂厂家供应

如何高效率实现细胞转染：瞬时转染与稳定转染常规转染技术根据基因表达时间的长短可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（很长转染）。瞬时转染的细胞中，外源基因得以表达但它们并不会整合到细胞的基因组中，也就不会被复制。细胞中瞬时转染的外源基因表达时间有限，通常*持续几天，直到外源基因在细胞分裂过程中因各种因素丢失为止。在瞬时转染质粒中往往都含有一个报告基因，来指示细胞中目标基因是否存在，这样的报告基因一般可以在转染后一两天内检测到。杭州细胞高效转染试剂当复合物接近细胞膜时，通过内吞作用形成内体进入细胞。

如何提高细胞转染实验效率：优化细胞生长状态密切观察您的细胞;确保它们状态良好。在开始转染细胞之前，先制定一个适当的种板方案，使细胞密度从转染开始到结束都保持较佳状态。增加成功几率—细胞是转染过程中的一个关键元素，它可以是影响结果的一致性和质量的较重要的变量。此外，还常用促有丝分裂刺激物(如，细菌转化，生长因子，条件培养基，以及滋养细胞)来活化原代培养细胞。贴壁细胞相比较悬浮细胞—在转染效率方面贴壁细胞和悬浮细胞之间的差异明显。天生趋于悬浮的细胞(如HL 60，Jurkat)非常难以转染。相反，天生为贴壁的细胞(如HEK，CHO)则可适应悬浮生长的条件。

DNA细胞转染步骤：1.提前现在细胞铺板提前现在将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞密度在60％左右为宜。2.转染过程⑴将0.8μg的DNA用25μl无血清稀释液稀释，充分混匀，制成DNA稀释液。注意：无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。⑵将2μlEntransterTM-H4000用25μl无血清稀释液体稀释，充分混匀，制成EntransterTM-H4000稀释液。室温静置5分钟。⑶将EntransterTM-H4000稀释液分别加入到DNA稀释液中，充分混匀（可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上），室温静置15分钟。转染复合物制备完成。⑷将转染复合物加入到含细胞和完全培养基的培养容器上，轻柔混匀。注意：①对本试剂，采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。一般的瞬时转染 方法多采用脂质体法。

细胞转染的常用方法：磷酸钙共沉淀原理：该法可用于瞬时或稳定转染。然而因其对pH、温度和缓冲液盐浓度的微小变化十分敏感，所得结果容易出现差异，且对许多类型的细胞培养物(尤其是原代细胞)具有细胞毒性，转染效率较差。实验步骤：将核酸与氯化钙在磷酸盐缓冲液中混合，同时控制好pH、温度等条件 → 室温孵育，生成浓缩DNA的极小不溶性颗粒沉淀 → 将颗粒型沉淀分散到细胞中，促进DNA粘附在细胞表面 → 共沉淀通过内吞作用进入胞浆 → 分析细胞瞬时基因表达或者选择稳定性传染。在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。长沙细胞高效转染试剂生产厂家

细胞中瞬时转染的外源基因表达时间有限，通常*持续几天。贵阳正规细胞高效转染试剂厂家供应

细胞转染为什么不能加血清：不同的细胞及转染试剂要求转染的条件是不同 的。较好是在靠前次实验前做一个预实验，比如：HeLa，293，CHO，COS7， MCF－7，HepG2等细胞，是否加血清，对不同的细胞是有不同的影响的，有些细胞是可以有血清的，有些加血清就会受影响。转染后在6小时左右较好换液且换为有血清的培养基，其一因为普通转染试剂对细胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的细胞的死亡。转染时不加血清是防止血清的干扰作用，转染后可适时加入。加入过早会引起未转染细胞的优势生长，过晚会引起较多细胞死亡。可实时观察1/5细胞变圆的时候加入血清。贵阳正规细胞高效转染试剂厂家供应

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