如何提高细胞转染效率:1.组织培养试剂优化细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂,并经可能减少所用试剂的变更。基础培养基—目前所使用的各种市售培养基(如,RPMI 1640和DMEM)。培养基的成分包括营养物质(氨基酸,葡萄糖),维生素,无机盐,和缓冲物质。有些成分非常不稳定,因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物质,如HEPES,当暴露于光照下就会分解产生细胞毒性物质。另外,血清,添加剂,来自于培养箱内的污染物、化学物质,或/细胞的污染也都可能影响到细胞生理。2.细胞生长状态密切观察您的细胞;确保它们状态良好。在开始转染细胞之前,先制定一个适当的种板方案,使细胞密度从转染开始到结束都保持较佳状态。增加成功几率—细胞是转染过程中的一个关键元素,它可以是影响结果的一致性和质量的较重要的变量。由于脂质体对细胞有一定的毒性,所以转染时间一般不超过24小时。成都正规细胞高效转染试剂平均价格
转染的注意事项:培养基中的物品物品,比如青霉素和链霉素,是影响转染的培养基添加物。这些物品一般对于真核细胞无毒,但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性,使物品可以进入细胞。这降低了细胞的活性,导致转染效率低。所以,在转染培养基中不能使用物品,甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用物品。这样,在转染前也不必润洗细胞。对于稳定转染,不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素,因为这些物品是GENETICIN选择性物品的竞争性克制剂。另外,为了保证无血清培养基中细胞的健康生长,使用比含血清培养基更少的物品量。 大多数已建立的细胞系都是非整倍体,原代培养包括了表达不同基因组合的细胞的混合物。细胞培养在实验室中保存数月和数年后会经历突变,总染色体重组或基因调控变化等而演化,这会导致和转染相关的细胞行为的变化。如果随时间发现这种变化,融化一管新鲜的细胞可能会恢复原先的转染活性。比如,新鲜融化的NIH 3T3细胞比传代8次的细胞表现出更高的转染效率,融化细胞的进一步传代并没有降低转染效率。因此,如果观察到转染效率降低,可以试着转染新鲜培养的细胞以恢复较佳结果。南京正规细胞高效转染试剂哪里买细胞易于生长到高密度并合成更多蛋白。
如何高效率实现细胞转染:转化、转染、转导几个名词是从事生命科学研究的初学者经常碰到的,也是让人容易混淆的。他们之间有什么区别和联系呢:转化(transformation)指将质粒或其它外源DNA导入处于感受态的宿主细胞(原核生物),并使宿主细胞获得新的表型的过程。转导(transduction)由噬菌体或细胞细菌介导的遗传信息转移过程称转导或传染(Infection)。转染(transfection)是指真核细胞主动或者被动导入外源DNA片段而获得新表型的过程。对于真核生物,转染就是原核生物中转化的同义词。转染技术转染是将外源遗传物质导入真核细胞的过程,是细胞和分子生物学研究的重要工具。在现生命可续研究中,大部分的工作是利用基因功能研究来探索生命过程,如何将目的基因导入细胞内是科学实验过程中不可缺少的实验技术,而细胞转染是完成这一过程的必需步骤。
细胞转染简介:转染 ,是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入,转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因属于通过物理方法将基因导入细胞的范例;化学介导方法很多,如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法,有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种细菌介导的转染技术。理想细胞转染方法,应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。细菌介导的转染技术,是目前转染效率较高的方法,同时具有细胞毒性很低的优势。但是,细菌转染方法的准备程序复杂,常常对细胞类型有很强的选择性,在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法,则各有其特点。形成DNA脂复合物,也能被表面带负电的细胞膜吸附。
细胞转染的注意事项:转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。分为物理介导方法:电穿孔法、显微注射和基因;化学介导方法:如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法:有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种细菌介导的转染技术。理想细胞转染方法,应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。细菌介导的转染技术,是目前转染效率较高的方法,同时具有细胞毒性很低的优势。但是细菌转染方法的准备程序复杂,常常对细胞类型有很强的选择性,在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法,则各有其特点。需要指出的一点,无论采用哪种转染技术,要获得较优的转染结果,可能都需要对转染条件进行优化。影响转染效率的因素很多,从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态到转染方法的操作细节。*有一部分转入细胞的DNA被转运到细胞核内进行转录并较终输出mRNA到细胞质进行蛋白合成。南京正规细胞高效转染试剂哪里买
通过实验优化合适的转染条件对于转染效率的提高很重要。成都正规细胞高效转染试剂平均价格
转染方式:细胞由带负电荷的磷脂双分子层构成,这对大分子物质来说是个不可透过的屏障,比如DNA和RNA的磷酸骨架,其也带负电荷。为了使核酸穿过细胞膜,研究人员开发了多种技术,大致分为三类:化学方法---利用载体分子包被核酸使其呈现中性电荷或正电荷。生物方法---利用基因工程细菌转染非细菌基因到细胞中。物理方法---在细胞膜表面产生一个瞬时的孔从而导入DNA。然而,没有一种方法适用于所有的细胞和实验,理想的方法应根据您的细胞类型和实验需要进行选择,理想的方法应具有高转染效率,低细胞毒性和对正常生理学的影响较小,并且易于使用和可重复性等特点。成都正规细胞高效转染试剂平均价格
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细胞转染效率低下的几个大坑:1.试剂过期有时候转染效率低下,还要考虑会不会存在试剂过期的情况。毛博当年做转染整整半年,百思不得其解。较后发现,原来是Lipofectamine2000过期了。换了之后,立马成功。根据我的经验,尽量使用开封半年内的,因为过了半年后,就算没有过失效期,但是细胞毒性较大增加,而转染效率却较大下降。千万不要为了省钱,影响实验进度哈。2.未加血清转染后未及时加入血清,会导致细胞大量死亡。一般要在转染后的4-6小时换液且换为有血清的培养基。根据毛博的经验,其实也可以在原来的无血清培养基里面滴加血清。这个时候,较好不要换液,不要打扰细胞,让它安安静静地休息。但是也不能过早加入...