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细胞转染实验注意事项：1.培养基中的物品物品是影响转染的培养基添加物。这些物品一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使物品可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率降低。这时候可以选择Entranster转染试剂，非脂质体试剂，培养基可加物品，避免了细胞染菌。2.设置阳性对照和阴性对照。3.一般在转染24-48h，靶基因即在细胞内表达。根据不同的实验目的，24-48h后即可进行靶基因表达的检测实验。4.如若建立稳定的细胞系，则可对靶细胞进行筛选，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，常用的真核表达基因载体的标志物有潮霉素和新霉素等。再通过融合或细胞内吞进入细胞。广州细胞高效转染试剂哪里买

影响转染试验的因素：1.转染试剂跟细胞系不匹配转染试剂跟细胞系也是讲究配合默契的，使用同一种试剂，不同细胞系转染效率通常不同。但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择较适合实验设计的转染试剂。当然，较适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。因为有些细胞系是不稳定的，可能随着培养时间的改变，培养条件的不同，不同的选择压力，可能引起不同的克隆选择。因此就算是同一个细胞系，在不同条件下转染能力的差异可能会很大。天津细胞高效转染试剂进货价大部分外源DNA会被核酸酶降解或随细胞分裂而稀释。

细胞转染那些事儿：1. 选择传代次数较低并处于对数生长期的细胞进行转染。对大多数细胞而言，均需要在转染当天或前现在铺板，第二天上午进行转染，48h后收集细胞进行功能检测。对于原代细胞，可用促有丝分裂刺激物进行细胞活化。2.对于贴壁细胞，一般要求在转染前一日，用胰酶处理为单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，较好在转染前4小时换一次新鲜培养液。3.支原体污染会严重降低细胞转染的效率，且支原体不会像细菌污染那么明显，因而转染前可用环丙沙星处理细胞以除去支原体。4.细胞转染时需要一定的细胞密度，以70-90%（贴壁细胞）或2×106-4×106细胞/ml（悬浮细胞）为宜。

细胞转染效率低下的几个大坑：1.准备不足做脂质体转染的时候，在开展正式实验前要多做预试验，优化转染条件。优化转染条件包括：脂质体的用量、DNA密度、细胞密度、脂质体和DNA混合孵育时间等等。2.电压过大做电转的时候，如果电压太大，往往会发生细胞大量死亡的情况。不同的细胞，需要的电压是不一样的。这就要求我们多做预实验，多摸索条件。对于大多数细胞来说，其较佳电压位于250-1250v/cm。另外，就是进行转染的细胞应该处于对数生长期。处于对数生长期的细胞的抗损伤能力是较强的。细胞浓度应该处于5x106到1x107／mL之间。每次转染的质粒应该控制在4-6 μg，如果﹥10μg，转染效率也较大降低。电击后，应该将DNA和细胞混合液在室温下放置10分钟，使细胞恢复损伤。瞬时转染的细胞中，外源基因得以表达但它们并不会整合到细胞的基因组中。

细胞转染为什么不能加血清：不同的细胞及转染试剂要求转染的条件是不同 的。较好是在靠前次实验前做一个预实验，比如：HeLa，293，CHO，COS7， MCF－7，HepG2等细胞，是否加血清，对不同的细胞是有不同的影响的，有些细胞是可以有血清的，有些加血清就会受影响。转染后在6小时左右较好换液且换为有血清的培养基，其一因为普通转染试剂对细胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的细胞的死亡。转染时不加血清是防止血清的干扰作用，转染后可适时加入。加入过早会引起未转染细胞的优势生长，过晚会引起较多细胞死亡。可实时观察1/5细胞变圆的时候加入血清。对于原代细胞，可用促有丝分裂刺激物进行细胞活化。唐山正规细胞高效转染试剂厂家供应

瞬时转染后，可在48h-72h细胞长满之后，提取细胞蛋白或者RNA。广州细胞高效转染试剂哪里买

细胞转染效率低下的几个大坑：1.试剂过期有时候转染效率低下，还要考虑会不会存在试剂过期的情况。毛博当年做转染整整半年，百思不得其解。较后发现，原来是Lipofectamine 2000过期了。换了之后，立马成功。根据我的经验，尽量使用开封半年内的，因为过了半年后，就算没有过失效期，但是细胞毒性较大增加，而转染效率却较大下降。千万不要为了省钱，影响实验进度哈。2.未加血清转染后未及时加入血清，会导致细胞大量死亡。一般要在转染后的4-6小时换液且换为有血清的培养基。根据毛博的经验，其实也可以在原来的无血清培养基里面滴加血清。这个时候，较好不要换液，不要打扰细胞，让它安安静静地休息。但是也不能过早加入血清。过早的话，会引起未转染的细胞疯狂生长。那么，什么是较佳时机呢？在20%的细胞变圆的时候，就是加血清的较佳时机。广州细胞高效转染试剂哪里买

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