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原代细胞培养之取材：取材作为原代细胞培养过程中的靠前部至关重要，以下几种取材技术，你都用过哪些方法呢？各类组织取材，操作及注意事项：1.皮肤和粘膜主要取皮片，面积一般2~4平方厘米。2.内脏和实体瘤：1）无菌环境；2）熟悉所需组织的类型和部位；3）要避开破溃、坏死液化部分，以防污染，尽量去除混杂的结缔组织。3.血液细胞一般多抽取静脉外周血，或从淋巴组织中(如脾、扁桃体、胸腺、淋巴结等)分离细胞，取材时应注意抗凝。4.骨髓、羊水、胸/腹水细胞严格无菌，注意抗凝，还要尽快分离培养，离心后，用无钙、镁PBS洗两次，再用培养液洗一次后即可培养，不宜低温存放。大多数组织可以制备原代细胞，但生长的快慢及难易程度不一。宁波原代细胞分离试剂盒单价

原代细胞和传代细胞培养有什么区别：一、定义不同：1、原代培养是指由体内取出组织或细胞进行的开始培养，也叫初代培养。2、传代培养是指需要将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养的过程。对单层培养而言，80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。二、特点不同：1、原代细胞培养与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。由于培养的细胞刚刚从组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。2、当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一则细胞之间相互接触而发生接触性克制，生长速度减慢甚至停止；另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。宁波正规原代细胞分离试剂盒厂家批发价只用于某些特定的细菌如猪传染性肠胃炎细菌的培养。

原代细胞的获取：酶消化法：所用试剂：胶原酶和胰酶。胶原酶的配制：建议看相关的文献进行胶原酶的配制。小编常用的是DMEM进行配制，配制好的胶原酶消化液放置在37℃水浴锅内预热（注意现用现配）。胰酶（酶联合法获取原代细胞中会加入胰酶，相关文章也蛮多的）胶原酶消化时间：根据组织特性，消化时间会有差异。以小鼠肾细胞为例，加入胶原酶Ⅰ进行消化后，放入37℃培养箱中消化45min~1h左右，期间每10min中震荡一次，知道组织块几乎完全消失为止（若是组织块剪得非常细小，时间可以短一些，30min左右即可）。

原代细胞与细胞系该如何选：原代细胞生长缓慢，一般认为，原代细胞培养的第1代和传代到第10代以内统称为原代培养。原代培养的细胞一般传至10代左右就不容易传下去了，细胞的生长会出现停滞，大部分细胞衰老死亡。但是有极少数的细胞能够度过“危机”而继续传下去，这些存活的细胞一般能够传到40-50代，这种传代细胞叫做细胞株。当细胞传至50代以后又会出现“危机”，这时有部分细胞的遗传物质发生了改变且带有变的特点，从而可能无限制地传代下去，这种传代细胞称为细胞系。永生化细胞系通常具有更快的倍增时间并可持续地分裂。

原代细胞的获取：1.培养时间无论是酶消化法还是组织块法，取样后培养时间较少需要一周以上的时间，期间可换液或者传代。2.换液时间无论酶消化法还是组织块法，在培养期间需要随时关注细胞的生长状况，需观察其是否贴壁，是否污染，组织块法要观察是否有细胞迁移出来。正常情况下48~72h可换液一次。3.细胞状态判断正常贴壁细胞在培养几天后，会逐渐贴满整个瓶底或者皿底，有的呈纤维状，有的呈多边形。下图均为比较健康的原代细胞图（左：小鼠成纤维细胞；右：鸡胚成纤维细胞；下：人成纤维细胞）。使用这种方式需注意勿使搅拌速度过快，否则即可使培养液溢出又容易造成污染。合肥正规原代细胞分离试剂盒直销厂家

原代培养的分离细胞在初次接触体外环境时，它们之间会互相影响。宁波原代细胞分离试剂盒单价

细胞冻存：通常我们不推荐重新冻存原代细胞，因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感，重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。与细胞系不同，原代细胞增殖有限，我们建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移，如果你正在使用一个增殖困难的细胞类型，你应该密切监测细胞形态，因为少量混杂的细胞（如成纤维细胞）可能随着时间的推移，大量生长从而成为主要细胞。正常的原代细胞培养，在无污染的情况下，建议培养基中不加抗体，抗体会影响细胞的某些基因变异从而导致实验数据有差异，所以cell systems的细胞在分离提取时就考虑到这点，他们不会采用任何抗体去分离和纯化的同时，通过酶消化或者离心洗涤的方法让细胞达到95%以上的纯度，这样得到的实验数据更为准确。宁波原代细胞分离试剂盒单价