外泌体相关技术在过去几年一直在快速发展,预计市场将大幅增长,因为它们可被应用到液体活检、精细医学和再生医学领域。特别是,一些疾病衍生的外泌体通过调节血管生成、转移和免疫来影响细胞的侵袭性,使其成为用于一些疾病检测、诊断和治病选择的极其有用的生物标志物来源。在风险投资方面,有很多市场活动。2016年1月,ExosomeDiagnostics公司在B轮融资中获得6000万美元资金,并于2017年7月获得3000万美元的C轮融资。同样,CodiakBiosciences公司于2016年由MDAnderson一些疾病中心与两家风险投资公司共同成立,以8000多万美元的A和B轮融资成立该公司。2017年11月29日,CodiakBioSciences公司又增加了7650万美元的C轮融资。在整个A、B和C轮融资中,CodiakBioSciences公司募集了惊人的1.685亿美元。外泌体的提取、分离方法:尺寸排阻色谱法和超滤法。南京外泌体提取试剂销售厂家
外泌体在肺病进程中的作用:在一些病症微环境中,一些病症细胞来源的外泌体能够诱导CD4+T分化为调节性T细胞,压制机体的抗一些病症免疫反应;肺病细胞分泌的外泌体含有miR-21和miR-29a,可在免疫细胞中结合并启动TLR8,使TLR介导的NF-κB信号通路活化,从而导致一些病症的生长和转移。在肺病的侵袭和转移过程中,细胞间通讯扮演着重要的角色。据有关报道称,NSCLC分泌的外泌体内TGFβ和IL10的高表达与肺病的转移密切相关。此外,启动的T细胞可以通过调控Fas信号通路增加基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达,进而促进肺病的转移。这些机制有望成为肺病治病的潜在靶点。虽然大多数外泌体都是促进一些病症的侵袭与转移,但也有报道称,外泌体miR-302b可以通过压制TGFβRⅡ来压制肺病细胞的转移与增殖。如纯度和回收率低,杂蛋白较多(假阳性),颗粒大小不均一,产生难以去除的聚合物。广州外泌体提取试剂进货价外泌体的提取方法学规范、统一定量及鉴定等。
外泌体的提取方法:1、色谱法。色谱法是利用根据凝胶孔隙的孔径大小与样品分子尺寸的相对关系而对溶质进行分离的分析的方法。样品中大分子不能进入凝胶孔,只能沿多孔凝胶粒子之间的空隙通过色谱柱,首先被流动相洗脱出来;小分子可进入凝胶中绝大部分孔洞,在柱中受到更强地滞留,更慢地被洗脱出。分离到的外泌体在电镜下大小均一,但是需要特殊的设备,应用不普遍。2、超滤离心。由于外泌体是一个大小约几十纳米的囊状小体,大于一般蛋白质,利用不同截留相对分子质量(MWCO)的超滤膜对样品进行选择性分离,便可获得外泌体。超滤离心法简单高效,且不影响外泌体的生物活性,是提取细胞外泌体的一种新方法。
外泌体与肺病预后:外泌体mirRNA和蛋白质被认为是NSCLC的预后因子。Dejima等在研究NSCLC患者预后的生物标志物时发现,外泌体miR-4257和miR-21的含量显着上升。此外,还有研究表明,低水平miR-146a-5p的NSCLC患者较高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的复发率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血浆的外泌体时发现,NY-ESO-1是其中对低生存率有显着影响的标志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系统分析了28位NSCLC患者体内的365种miRNA,其中let-7f、miR-30e-3p和miR-20b表达均下调,进一步研究发现,let-7f和miR-30e-3p水平可以区分早期和晚期NSCLC患者,高水平let-7f和miR-30e-3p与不良预后密切相关。如何高效地提取外泌体是实现这项新兴液体活检技术临床常规化应用的关键。可将外泌体吸附并分离出来。
外泌体的提取分离:1、超速离心法(差速离心)。超离法是常用的外泌体纯化手段,采用低速离心、高速离心交替进行(如图所示),可分离到大小相近的囊泡颗粒。超离法因操作简单,获得的囊泡数量较多而广受欢迎,但过程比较费时,且回收率不稳定(可能与转子类型有关),纯度也受到质疑;此外,重复离心操作还有可能对囊泡造成损害,从而降低其质量。2、密度梯度离心。在超速离心力作用下,使蔗糖溶液形成从低到高连续分布的密度阶层,是一种区带分离法。通过密度梯度离心,样品中的外泌体将在1.13-1.19g/ml的密度范围富集。此法获得的外泌体纯度较高,但步骤繁琐,耗时。外泌体提取:根据外泌体的大小,从蛋白质和其他大分子中分离外泌体。上海外泌体提取试剂单价
外泌体的特殊结构和功能,使得它具有潜在的应用价值,可以作为诊断多种疾病的生物指标。南京外泌体提取试剂销售厂家
1983年,外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现,1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体,且外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡,参与细胞间通讯,对外泌体的研究兴趣日益增长,无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。如何高效地提取外泌体是实现这项新兴液体活检技术临床常规化应用的关键南京外泌体提取试剂销售厂家
外泌体(Exosome)是由细胞分泌而来的微小囊泡,直径约为30-200nm,密度在1.13-1.21g/ml,具有杯状形态、双层膜结构,天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和细胞培养基等生物体液中。包括瘤细胞在内几乎所有类型的细胞(免疫细胞、神经细胞、干细胞),都可以产生并释放exosome。Exosome内含有与细胞来源相关的蛋白质rRNA和microRNA,Exosome可通过细胞膜受体直接受体细胞,也可运输蛋白质、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA,甚至细胞器进入受体细胞,参与细胞间通讯。Exosome在免疫应答、炎症反应、血管生成、凋亡、凝血和废物处理等生理过程发挥关键作...