外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30-150nm),现今,其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年,外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现,1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体,且外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡,参与细胞间通讯,对外泌体的研究兴趣日益增长,无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。外泌体的提取、分离方法:梯度密度离心法。石家庄正规外泌体提取试剂厂家批发价
由于这些核酸被囊膜包裹而被保护,稳定性高,不易降解,是一种用于一些病症诊断和预后监测的非常理想的新型生物标记物一些疾病的早期诊断、用药监控、预后判断。近年来,随着人们对外泌体的研究和认识加深,外泌体检测作为一种新型的液体活检热点技术已被许多临床科研机构普遍地应用于一些病症和疾病的无创诊断、治病和监测;如何高效地提取外泌体是实现这项新兴液体活检技术临床常规化应用的关键。外泌体(Exosome)是从体液(尿液、血液、唾液、腹水、胸腹水等)和细胞液中快速提取的,其是活细胞分泌到胞外的囊泡样小体,含有多种蛋白和核酸分子(DNA、RNA、以及miRNA),在体内细胞间物质和信号转导中起到重要作用。开封外泌体提取试剂厂家推荐外泌体的提取方法:超滤离心。
1983年,外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现,1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体,且外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡,参与细胞间通讯,对外泌体的研究兴趣日益增长,无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。
研究初次发现疟原虫传染小鼠血浆外泌体(exosomes)能够压制一些病症血管生成,并初步阐明其分子机制。研究加深了对疟原虫传染宿主所分泌的外泌体与一些病症血管生成之间的相互作用的认识,为开发疟原虫传染来源的外泌体作为一种新型抗一些病症制剂奠定了基础。研究人员选用肺病小鼠模型作为研究对象,从传染疟原虫的小鼠血浆中获得外泌体,并将这些外泌体注射到小鼠的一些病症内部,并与没有疟原虫传染的小鼠血浆外泌体进行对照。研究发现,疟原虫传染小鼠的血浆外泌体明显压制一些病症血管的生成。进一步的研究发现,疟原虫传染的小鼠血浆外泌体通过至少四种特殊的微小RNA(miR16-5p/17-5p/322-5p/497-5p)压制血管内皮细胞VEGF受体(VEGFR2)的表达从而阻断血管生成的信号通路。这些发现加深了人们对疟原虫抗病机理的理解,并为疟原虫疗法治病一些疾病的临床研究提供进一步的理论依据。以提取尿液中的外泌体为例,每次至少需要200毫升的尿液量。
外泌体(Exosome)是由细胞分泌而来的微小囊泡,直径约为30-200nm,密度在1.13-1.21g/ml,具有杯状形态、双层膜结构,天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和细胞培养基等生物体液中。包括瘤细胞在内几乎所有类型的细胞(免疫细胞、神经细胞、干细胞),都可以产生并释放exosome。Exosome内含有与细胞来源相关的蛋白质rRNA和microRNA,Exosome可通过细胞膜受体直接受体细胞,也可运输蛋白质、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA,甚至细胞器进入受体细胞,参与细胞间通讯。Exosome在免疫应答、炎症反应、血管生成、凋亡、凝血和废物处理等生理过程发挥关键作用,不同细胞来源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不尽相同,可作为多种疾病的早期诊断标记物,也能作为靶向药物的载体进行疾病。miRNA是一类22nt左右大小的非编码分子,它可以通过外泌体从一个地方转运到另外一个地方行使基因沉默功能。通过检测外泌体中miRNA表达变化,可以发现外泌体中miRNA特异性功能在体内细胞间物质和信号转导中起到重要作用。石家庄正规外泌体提取试剂厂家批发价
外泌体提取:使用抗体包被珠子的分离不适合从大量样本中获得外泌体。石家庄正规外泌体提取试剂厂家批发价
外泌体的提取、分离方法:开发高效、快速、稳定,并且保持外泌体结构和生物功能完整性的方法,是目前外泌体应用于临床的基础和前提。从细胞上清和体液中提取分离外泌体的方法很多,但是外泌体的纯度和产量却和分离方法息息相关。通常分离步骤少、产率高,但是纯度会受到影响。鉴于每种分离方法都有其优缺点,实验可以根据样本来源、下游实验目的等,选择合适的外泌体分离方法。2015年,国际囊泡组织(InternationSocietyforExtracelluarVesicles,ISEV)指出,简单依靠一种分离方法得到的外泌体的纯度和产量都难满足实验的需求。因此,推荐联合使用各种方法,从而得到高纯度和高产量的外泌体。石家庄正规外泌体提取试剂厂家批发价
外泌体的提取主要包括以下几种方式。一是超速离心法,这是目前外泌体提取较常用的方法。此种方法得到的外泌体量多,但是纯度不足,电镜鉴定时发现外泌体聚集成块,由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准,也有一些研究认为此种方法得到的是微泡不是外泌体。二是过滤离心,这种操作简单、省时,不影响外泌体的生物活性,但同样存在纯度不足的问题。三是密度梯度离心法,用此种方法分离到的外泌体纯度高,但是前期准备工作繁杂,耗时,量少。外泌体检测作为一种新型的液体活检热点技术已被许多临床科研机构普遍地应用于一些病症和疾病的无创诊断。外泌体提取:用这种聚合物沉淀具有许多优点,包括对分离的外泌体影响小、pH中性等。开封正规外泌...