具有细胞毒性极低、转染后细胞存活率高,生成可信任的生理学相关数据。2.操作简便、节省时间,只需对X-tremeGENE9DNA转染试剂进行简单稀释,再与质粒DNA共同孵育,即可直接向细胞添加反应混合物(有无血清均可)。3.对于常用细胞无需进行费时费力的优化工作。X-tremeGENEHPDNA转染试剂简介:X-tremeGENEHPDNA转染试剂是一种高效的无动物源成分的低毒转染试剂,兼容含血清或不含血清的培养基,可用于转染各类真核细胞(包括昆虫细胞)以及多种难转染细胞系。优势:瞬时表达分析所需的人力和时间比稳定表达少。北京细胞高效转染试剂厂家推荐
DNA细胞转染步骤:1.提前现在细胞铺板提前现在将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞密度在60%左右为宜。2.转染过程⑴将0.8μg的DNA用25μl无血清稀释液稀释,充分混匀,制成DNA稀释液。注意:无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。⑵将2μlEntransterTM-H4000用25μl无血清稀释液体稀释,充分混匀,制成EntransterTM-H4000稀释液。室温静置5分钟。⑶将EntransterTM-H4000稀释液分别加入到DNA稀释液中,充分混匀(可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上),室温静置15分钟。转染复合物制备完成。⑷将转染复合物加入到含细胞和完全培养基的培养容器上,轻柔混匀。注意:①对本试剂,采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。金华深圳细胞高效转染试剂细胞易于生长到高密度并合成更多蛋白。
细胞转染效率低下的几个大坑:1.不注意细节在转染之前更换一次37℃预温的培养基,可提高转染效率。脂质体和DNA/RNA混合物应当一滴一滴地滴下来,从培养皿一边滴到另一边,边滴边轻摇培养皿,以确保均匀分布和避免局部高浓度。这些都是一些细枝末节,但是,如果不注意的话,也会造成转染效率低下。2.细胞状态不好细胞状态不好,会导致转染效率低下。一般进行转染的细胞应该处于对数生长期。如果是贴壁细胞的话,贴壁率应该在70-80%;如果是悬浮细胞的话,应该是6X105个/孔(24孔板),一般是转染前现在换液,转染前用无血清培养基或PBS洗细胞一次。转染的整个过程都不应该有物品。
细胞转染的原理、操作步骤以及小技巧:一、脂质体(Liposome)转染方法原理脂质体作为体内和体外输送载体的工具,已经研究的十分普遍,中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA,借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体,DNA并没有预先包埋在脂质体中,而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上,形成DNA-阳离子脂质体复合物,从而吸附到带负电的细胞膜表面,经过内吞被导入细胞。优点:与其它方法相比,有较高的效率和较好的重复性,它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中,是目前条件下较方便的转染方法之一。选择传代次数较低并处于对数生长期的细胞进行转染。
细胞转染的注意事项:物品(PS)物品,比如青霉素和链霉素,是影响转染的培养基添加物。这些物品一般对于真核细胞无毒,但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性,使物品可以进入细胞。这降低了细胞的活性,导致转染效率低。所以,在转染培养基中不能使用物品,甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用物品。这样,在转染前也不必润洗细胞。对于稳定转染,不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素,ICIN选择性物品的竞争性克制剂。另外,为了保证无血清培养基中细胞的健康生长,使用比含血清培养基更少的物品量。阳离子脂质体转染试剂脂质转染试剂,以其适用宿主范围广。南昌细胞高效转染试剂厂家
大部分细胞可以在无血清培养基中几个小时内保持健康。北京细胞高效转染试剂厂家推荐
细胞转染效率低下的几个大坑:1.准备不足做脂质体转染的时候,在开展正式实验前要多做预试验,优化转染条件。优化转染条件包括:脂质体的用量、DNA密度、细胞密度、脂质体和DNA混合孵育时间等等。2.电压过大做电转的时候,如果电压太大,往往会发生细胞大量死亡的情况。不同的细胞,需要的电压是不一样的。这就要求我们多做预实验,多摸索条件。对于大多数细胞来说,其较佳电压位于250-1250v/cm。另外,就是进行转染的细胞应该处于对数生长期。处于对数生长期的细胞的抗损伤能力是较强的。细胞浓度应该处于5x106到1x107/mL之间。每次转染的质粒应该控制在4-6μg,如果﹥10μg,转染效率也较大降低。电击后,应该将DNA和细胞混合液在室温下放置10分钟,使细胞恢复损伤。北京细胞高效转染试剂厂家推荐
细胞转染效率低下的几个大坑:1.试剂过期有时候转染效率低下,还要考虑会不会存在试剂过期的情况。毛博当年做转染整整半年,百思不得其解。较后发现,原来是Lipofectamine2000过期了。换了之后,立马成功。根据我的经验,尽量使用开封半年内的,因为过了半年后,就算没有过失效期,但是细胞毒性较大增加,而转染效率却较大下降。千万不要为了省钱,影响实验进度哈。2.未加血清转染后未及时加入血清,会导致细胞大量死亡。一般要在转染后的4-6小时换液且换为有血清的培养基。根据毛博的经验,其实也可以在原来的无血清培养基里面滴加血清。这个时候,较好不要换液,不要打扰细胞,让它安安静静地休息。但是也不能过早加入...