PAS染色试剂配制及染色方法:1.材料与方1.1实验材料新鲜小白鼠肝脏、肾脏标本各30例,均来自我室实验材料。1.2主要试剂1.2.1AAF固定液又称酒精醋酸福尔马林混合固定液,其配方:无水乙醇80mL,冰醋酸5mL、甲醛10mL。1.2.2Carnoy固定液氯仿300mL,冰醋酸100mL,95%酒精600mL。1.2.3过碘酸溶液0.5g过碘酸(HIO)溶于100mL蒸馏水或者70%酒精溶液中,或者按如下配方配制:过碘酸0.8g,95%乙醇70mL,醋酸钠0.27g,水20mL。待溶解后置于4℃冰箱避光保存。1.2.4无色品红液(Schiff氏液)在三角烧内加入蒸馏水500mL,煮沸后,在保持微沸的情况下,加入碱性品红2.5g,并不断摇动约5min(勿使之沸腾),使碱性品红彻底溶解(溶解液为深红色)。冷却到50℃时,过滤,加入1N盐酸50mL,再待冷却至25℃时加入偏重亚硫酸钠2.5g,塞住瓶口,摇动容器以充分混合(此时颜色明显变淡),然后避光放置或冰箱内24h拥有针对不同组织的特殊固定液。安徽咨询糖原染色试剂盒厂家直销
糖原染色是病理学中常规的染色方法之一,McManus在1946年较先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白,该法常用来显示糖原和其他多糖,该染色试剂盒不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、霉菌、色素、淀粉样物质、基底膜等。过碘酸(又称高碘酸)是一种强氧化剂,它能氧化糖类及有关物质中的1,2-乙二醇基,使之变为二醛,醛不Schiff试剂能结合成一种品红化合物,产生紫红色。由于高碘酸还可氧化细胞内其他物质,使用时应注意选择好高碘酸浓度和氧化时间,使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于过氧化,这是很关键的步骤。PAS技术是很少可检测不同种类的黏液物质(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法,但PAS技术却不能区别黏蛋白和糖原。若要冸确鉴别黏液物质(如黏蛋白或糖原),需加入糖原消化步骤。大多数情冴下可用α–淀粉酶或麦芽淀粉酶来催化糖原的糖苷键水解,形成水溶性的双糖-麦芽糖,在应用PAS技术之前将糖原从组织切片上除去。人类的唾液被认为是消化糖原的一种有效手段,但是出于安全以及缺乏标冸唾液的考虑,不主张应用唾液江苏如何使用糖原染色试剂盒平均价格冷冻切片染色效果不佳,成熟时间2个月,染色时间一般15-20分钟。
糖原染色用于鉴别淋巴系统细胞增生的性质鉴别红细胞系统增生的性质[英文缩写]PAS[参考值]正常人淋巴细胞PAS反应积分正常人幼红细胞PAS反应积分[临床意义]恶性淋巴瘤、急慢性淋巴细胞白血病时PAS积分升高巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、再障贫血时幼红细胞PAS反应多为阴性红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征时幼红细胞PAS反应积分可40甚至高达100--200以上用于不典型巨核细胞与李-斯细胞的鉴别前者PAS反应为强阳性后者为阴性或弱阳性;用于高雪细胞和尼曼一匹克细胞的鉴别前者PAS反应为强阳性而后者反应为阴性或弱性
糖原染色试剂盒。含乙二醇基的多糖经过碘酸氧化,产生醛基,与雪夫(Schiff)试剂中无色品红结合,形成紫红色沉淀物定位于含糖原的胞浆中。该反应称为碘酸-雪夫(PAS)反应。(1)雪夫液配制:碱性品红1g溶于200ml沸水中,冷却60℃时过滤,加1mmol/L盐酸20ml,再冷却至25℃左右,加偏重亚硫酸钠(Na2S2O5)2g,混合后放棕色瓶中,置暗处24h,无色即可放冰箱中保存,呈微红色,则加活性炭1~2g,吸附过滤使成无色液体,放冰箱中保存。若溶液变红,即不能再用。(2)10g/L过碘酸水溶液:过碘酸(HIO4·2H2O)1g,加蒸馏水至10ml。溶解后盖紧放冰箱备用,一般可用3个月,变黄则失效保存冰箱备用。溶液如显浅红色或草黄色,染色效果较差。
糖原染色:细胞内含1,2-乙二醇基的多糖类经过碘酸氧化后产生醛基,与特殊染液作用,使无色品红变成红色化合物,沉淀于胞质之中。红色的深浅与细胞中起反应的1,2-乙二醇基的量呈正比。用于不典型巨核细胞与李—斯细胞的鉴别,前者PAS反应为强阳性,后者为阴性或弱阳性;用于高雪细胞和尼曼一匹克细胞的鉴别,前者PAS反应为强阳性,而后者反应为阴性或弱性。正常值正常情况下,红细胞系统的原、幼红细胞和成熟红细胞;粒细胞系统的原粒细胞、原单核细胞和大多数淋巴细胞为阴性反应。自早幼粒阶段以后的粒细胞和幼单核细胞可呈弱阳性反应。推荐用于骨和软骨的染色。安徽咨询糖原染色试剂盒厂家直销
过碘酸溶液和苏木素溶液浓度更低,不宜过染。安徽咨询糖原染色试剂盒厂家直销
糖原及粘液染色法注意事项:1、糖原的固定要及时,而且标本要新鲜。2、如用无水酒精作糖原的固定剂,有它的弊病,因无水酒精渗透较慢,而且容易产生极化,(极化是糖原颗粒趋向于细胞的一端)。故用Gendre氏固定液效果较佳,其配法如下:苦味酸饱和于95%酒精85ml40%甲醛10ml冰醋酸5ml3、各种试剂必须化学纯,亚硫酸钠须有浓厚气味,器皿必须洁净而干燥,染色缸亦是。4、如果Schiff氏试剂,在经过活性碳吸附漂白后不显无色,首先应考虑试剂中的偏重亚硫酸钠是否失效。如果偏重亚硫酸钠气味不浓,使用时可考虑适当的增加用量。其次考虑碱性品红本身,常常虽属同一生产厂家,但不同批号,其效果就可能不同,应特别引起注意。安徽咨询糖原染色试剂盒厂家直销
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糖原pas染色液配制及使用方法:1、常规固定,常采用10%的福尔马林,常规脱水包埋。2、石蜡切片脱蜡入蒸馏水;冰冻切片直接入蒸馏水。3、自来水冲洗2~3min,再用蒸馏水浸洗2次。4、入过碘酸溶液,室温放置,一般不宜超过10min。5、自来水冲洗1次,再用蒸馏水浸洗2次。6、入SchiffReagent,置于室温阴暗处浸染。7、自来水冲洗10min。8、入苏木素染色液,染细胞核。9、酸性乙醇分化液分化。_x005f_x005f_x005f_x000c_10、自来水冲洗10~15min,更换蒸馏水清洗,使其返蓝。11、逐级常规乙醇脱水。二甲苯透明,中性树胶封固。加入少量活性碳并震荡、过滤,此时溶...