与DNA不同,RNA一般为单链长分子,很多RNA也需要通过碱基配对原则形成一定的二级结构乃至三级结构来行使生物学功能。RNA是以DNA的一条链为模板,以碱基互补配对原则,转录而形成的一条单链,主要功能是实现遗传信息在蛋白质上的表达,是遗传信息向表型转化过程中的桥梁。在此过程中,转运RNA是携带与三联体密码子对应的氨基酸残基与正在进行翻译的mRNA结合,而后核糖体RNA将各个氨基酸残基通过肽键连接成肽链进而构成蛋白质分子。有些生物,例如一些病菌,也直接使用RNA作为遗传信息的载体,而不是DNA。异硫氰酸胍属于解偶剂,是一类强力的蛋白质变性剂,可溶解蛋白质。唐山正规RNA提取试剂哪家便宜
细胞RNA提取的方法:实验提取步骤:标准Trizol提取步骤为液氮研磨--加入Trizol裂解--加入氯仿抽提--离心--加入氯丙醇沉淀--离心--酒精洗涤--离心。将细胞培养皿置于冰上,加入Trizol裂解5-10分钟,用泵头轻轻吹打后吸取液体放入进口EP管中。加入1/5体积的氯仿,上下混匀液体,4度静置10-15分钟。(氯仿为有机溶剂,有效的使有机相和无机相迅速分离。有机相中主要是酚和蛋白结合,从而使得蛋白和RNA脱离,RNA进入水相)。4度离心15分钟,一定注意选择低温离心。离心后分成三层,RNA在上清里,从离心机轻轻拿出EP管,以免管内物质震荡导致下层沉淀激起。吸取上清的时候一定要动作轻柔,切忌吸取太多,一般吸到400-500ul,避免吸到下层沉淀,将液体置于新的EP管中。加入等体积异丙醇,4度静置10min,然后12000rpm离心10min。无锡正规RNA提取试剂厂家批发价所提取的RNA完整性好、纯度高,可用于分子生物学后实验。
RNA提取试剂TRIpure是基于世界上使用较普遍的异硫氰酸胍/酚法研制而成的总RNA抽提试剂。在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。无论是人、动物、植物还是细菌组织,该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。TRIpure试剂操作上的简单性允许同时处理多个样品,所有的操作可以在一小时内完成。TRIpure抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染,故而能够作RNA印迹分析、斑点杂交、poly(A)+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆等。和进口品牌实验对照显示,公司的产品质量已经达到甚至超过了进口产品的质量。
RNA提取注意事项:1、组织样本要尽可能的新鲜,避免反复冻融。2、提取时组织要充分研磨,组织量不宜过少,更不宜过多。3、加入裂解液后应给予充分的孵育时间,使样本充分裂解。4、在用Trizol法提取时,分层后吸取上清的原则是“宁愿少吸,不能多吸”,千万不能提取到中间层,否则会导致严重的基因组DNA污染。5、洗涤时洗涤液应充分浸润到管壁的四周,确保洗涤彻底。6、柱式提取法,洗涤完后除了对柱子进行空离后,还应当将吸附柱置于超净台内吹风5~10min,使有机溶剂充分挥发干。7、柱式法较后洗脱时候,当加入DEPC水后还应孵育3~5min,或者提前将DEPC水加热至60℃,可提高洗脱得率。传统的Trizol裂解异丙醇沉淀法较后RNA是用DEPC水溶解沉淀,则应当给予适当溶解时间,并用泵头不断吹吸离心管底部。总RNA提取试剂试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。
DNA称脱氧核糖核酸,是一种分子,双链结构,由脱氧核糖核苷酸(成分为:脱氧核糖、磷酸及四种含氮碱基)组成。可组成遗传指令,引导生物发育与生命机能运作。主要功能是长期性的资讯储存,可比喻为“蓝图”或“食谱”。RNA称核糖核酸,是以DNA的一条链为模板,以碱基互补配对原则,转录而形成的一条单链,主要功能是实现遗传信息在蛋白质上的表达,是遗传信息传递过程中的桥梁。RNA的碱基主要有4种,即A腺嘌呤,G鸟嘌呤,C胞嘧啶,U尿嘧啶。其中,U尿嘧啶取代了DNA中的T胸腺嘧啶而成为RNA的特征碱基。RNA是核糖核酸,DNA是脱氧核酸。区别:1.两性解离:DNA无,bai只有酸解离,碱基被屏蔽(在分子内部形成了H键)。RNA有,有PI。2.粘度大:DNA;RNA,粘度由分子长度/直径决定,DNA为线状分子,RNA为线团。3.碱的作用:DNA耐碱RNA易被碱水解。4.显色反应:鉴别DNA和RNA+浓HClRNA------→绿色化合物DNA------→蓝紫色化合物苔黑酚。二苯胺啡啶溴红(荧光染料)和溴嘧啶都可对DNA染色,原理是卡在分子中,DNA的离心和电泳显色可用它们。tRNA是mRNA上遗传密码的识别者和氨基酸的转运者。芜湖正规RNA提取试剂价格
其价格比进口试剂盒要便宜许多,且效果还不错,性价比还可以。唐山正规RNA提取试剂哪家便宜
石蜡包埋组织RNA快速提取试剂盒(离心柱型):原理简介:改进的异硫氰酸胍/酚一步法裂解细胞和灭活RNA酶,然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,较后低盐的RNasefreewater将纯净RNA(RNA)从硅基质膜上洗脱。试剂盒特点:1、离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界有名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。2、结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好,纯度高和离心柱方便快捷的优点,不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程,RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。3、独有的MRL裂解液配方,可以有效的消除基因组污染。4、多次漂洗去蛋白过程,提取RNA纯度更高。唐山正规RNA提取试剂哪家便宜
拭子RNA提取试剂的选择?拭子样本的量与提取的核酸量成正比,如果要提高核酸得率,也可通过增加样本量来实现。一般先取一根拭子的涮洗液样本,然后进行提取,如结果不理想可考虑增加样本量或重新采样。但如果增加样本量或重新采样还不能得到满意结果,应及时考虑更换试剂盒。目前国内常用的拭子核酸提取试剂有Q、Biog等。根据我们的经验,Q和T品牌试剂盒的拭子RNA提取得率(一根口腔拭子在口咽部来回刮擦10次)在0.5-3.5ug。同样处理的口咽拭子,Biog试剂盒的提取得率在1-4ug,基本上都能满足下游PCR相关实验的要求。移去水相后,用乙醇可从中间相沉淀得到DNA,加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。厦门...