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细胞转染实验简介：实验原理外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和细菌介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞;细菌法是利用包装了外源基因的细菌传染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大;细菌法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响;所以现在对于很多普通细胞系，一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。在转染过程中是可以使用血清的。宁波细胞高效转染试剂厂家直销

细胞转染方法：1.脂质体转染法阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用，将DNA分子包裹入内，形成DNA脂复合物，也能被表面带负电的细胞膜吸附，再通过融合或细胞内吞进入细胞。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前实验室较方便的转染方法之一，其转染率较高，优于磷酸钙法。由于脂质体对细胞有一定的毒性，所以转染时间一般不超过24小时。常用细胞类型：cos-7、BHK、NIH3T3、Hela等2.电穿孔转染法电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内，这种方法就是电穿孔。当遇到某些脂质体转染效率很低或几乎无法转入时建议用电穿孔法转染。一般情况下，高电场强度会杀死50%-70%的细胞。现在针对细胞死亡开发出了一种电转保护剂，可以较大的降低细胞的死亡率，同时提高电穿孔转染效率宁波细胞高效转染试剂厂家直销使用基质珠做为固相支持可以使贴壁细胞悬浮生长。

细胞转染为什么不能加血清：不同的细胞及转染试剂要求转染的条件是不同的。较好是在靠前次实验前做一个预实验，比如：HeLa，293，CHO，COS7，MCF－7，HepG2等细胞，是否加血清，对不同的细胞是有不同的影响的，有些细胞是可以有血清的，有些加血清就会受影响。转染后在6小时左右较好换液且换为有血清的培养基，其一因为普通转染试剂对细胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的细胞的死亡。转染时不加血清是防止血清的干扰作用，转染后可适时加入。加入过早会引起未转染细胞的优势生长，过晚会引起较多细胞死亡。可实时观察1/5细胞变圆的时候加入血清。

大多数已建立的细胞系都是非整倍体，原代培养包括了表达不同基因组合的细胞的混合物。细胞培养在实验室中保存数月和数年后会经历突变，总染色体重组或基因调控变化等而演化，这会导致和转染相关的细胞行为的变化。如果随时间发现这种变化，融化一管新鲜的细胞可能会恢复原先的转染活性。比如，新鲜融化的NIH3T3细胞比传代8次的细胞表现出更高的转染效率，融化细胞的进一步传代并没有降低转染效率。因此，如果观察到转染效率降低，可以试着转染新鲜培养的细胞以恢复较佳结果。对大多数细胞而言，均需要在转染当天或前现在铺板，第二天上午进行转染。

细胞转染那些事儿：1.设置阴性和阳性对照：一般在转染后24-48h,靶基因即在细胞内表达。可依据不同的实验目的，24-48h后即可进行靶基因表达的检测等实验。2.转染后效率的检测方法：观察转染后细胞荧光情况；qPCR验证；WB检测敲减或过表达蛋白。3.转染效率低，可采取以下两种方法：1)复转染，即转染后12-24h再进行转染，前提是该细胞对脂质体的耐受性较好，转染后细胞死亡数较少。2)通过药筛来杀死未转入成功的细胞，前提是该质粒带有物品抗性的基因。4.电转时，不同的细胞需要的电压是不一样的，需要做预实验，摸索较佳条件。对于大多数细胞而言，较佳电压位于250-1250v/cm。电击后，应该将DNA和细胞混合液在室温下放置10min,使细胞恢复损伤。加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。贵阳正规细胞高效转染试剂厂家批发价

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细胞转染实验注意事项：1.如为贴壁生长细胞，一般要求在转染前一日，必须应用胰酶处理成单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，转染当日的细胞密度以70-90%（贴壁细胞）或2×106-4×106细胞/ml（悬浮细胞）为宜，较好在转染前4h换一次新鲜培养液。2.用于转染的质粒DNA必须无蛋白质，无RNA和其他化学物质的污染，OD260/280比值应在1.8以上。3.培养基中的血清在开始准备DNA和阳离子脂质体试剂稀释液时要使用无血清的培养基，因为血清会影响复合物的形成。其实，只要在DNA-阳离子脂质体复合物形成时不含血清，在转染过程中是可以使用血清的。宁波细胞高效转染试剂厂家直销