细胞高效转染试剂推荐厂家

细胞转染操作方法：转染，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因属于通过物理方法将基因导入细胞的范例；化学介导方法很多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法，有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种细菌介导的转染技术。理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。细菌介导的转染技术，是目前转染效率较高的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。但是，细菌转染方法的准备程序复杂，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。对于原代细胞，可用促有丝分裂刺激物进行细胞活化。细胞高效转染试剂推荐厂家

细胞转染效率影响因素：1.细胞密度一般来说，当细胞密度达到60%～80%时进行转染可以取得较高的转染效率，过低或过高都会影响转染效果。2.细胞生长状态这点非常关键，很多时候传代次数太少或者太多都将导致细胞对转染试剂敏感度的改变。因此，为了提高转染效率以及转染稳定性、降低细胞毒性，应尽量使用适度传代的细胞系，并在不同次实验时保持细胞传代次数的一致性。3.细胞种类不同细胞种类的细胞在做转染时所需要的转染体系是不同的，不能一种体系用在所有类型细胞的转染实验。广州正规细胞高效转染试剂哪家便宜由于脂质体对细胞有一定的毒性，所以转染时间一般不超过24小时。

细胞转染实验简介：实验原理外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和细菌介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞;细菌法是利用包装了外源基因的细菌传染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大;细菌法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响;所以现在对于很多普通细胞系，一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。

细胞转染的原理、操作步骤以及小技巧：脂质体转染操作步骤：(1)细胞培养：取6cm细胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105个细胞培养液，37℃CO2培养密度至40%~60%，密度过大，转染后不利筛选细胞。(2)转染液制备：在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)A液：用不含血清培养基稀释1ug质粒DNA。B液：用不含血清培养基稀释2ul脂质体。分别将A液与B液轻弹混匀，静置5分钟。(3)吸取B液加入至A液中，轻弹混匀。室温中置10-15分钟。(4)转染准备：用1mL不含血清培养液漂洗两次，再加入4mL不含血清培养液。(5)转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37℃温箱置6~24小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。(6)瞬时转染后，可在48h-72h细胞长满之后，提取细胞蛋白或者RNA，验证敲减/过表达效率。在转染过程中是可以使用血清的。

细胞转染为什么不能加血清：传统的转染试剂一般会增加细胞的通透性，这样会把血清中的成分带入细胞，造成细胞毒性。阳离子脂质体，转染的过程是带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞。血清中含有大量的蛋白质，在转染过程中，带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附，影响转染效率。同时，也会将血清中的蛋白带入细胞，引发细胞毒性，故不能有血清转染。这些转染试剂要求在转染前换无血清培养基，转染后4-6h在更换成有血清培养基，这其实是为了减轻转染造成的细胞毒性和转染效率的降低。瞬时转染的细胞中，外源基因得以表达但它们并不会整合到细胞的基因组中。天津正规细胞高效转染试剂进货价

转化、转染、转导几个名词是从事生命科学研究的初学者经常碰到的。细胞高效转染试剂推荐厂家

如何提高细胞转染效率：1.组织培养试剂优化细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂，并经可能减少所用试剂的变更。基础培养基—目前所使用的各种市售培养基(如，RPMI1640和DMEM)。培养基的成分包括营养物质(氨基酸，葡萄糖)，维生素，无机盐，和缓冲物质。有些成分非常不稳定，因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物质，如HEPES，当暴露于光照下就会分解产生细胞毒性物质。另外，血清，添加剂，来自于培养箱内的污染物、化学物质，或/细胞的污染也都可能影响到细胞生理。2.细胞生长状态密切观察您的细胞;确保它们状态良好。在开始转染细胞之前，先制定一个适当的种板方案，使细胞密度从转染开始到结束都保持较佳状态。增加成功几率—细胞是转染过程中的一个关键元素，它可以是影响结果的一致性和质量的较重要的变量。细胞高效转染试剂推荐厂家