芯弃疾JX-8B数字ELISA产品
每个生物实验室都用得起的单分子免疫检测
数字ELISA测量蛋白质浓度远低于传统ELISA的能力源于两种效应:1)SiMoA对酶标记的高度敏感性;以及2)通过数字化蛋白质检测可以实现的低背景信号。任何免疫测定的灵敏度由其灵敏度决定。检测技术到标签,抗体亲和力,试验背景,以及背景测量值的变异(%CV)27.SiMoA对酶非常敏感标签(图2)为在数字ELISA中检测亚飞摩尔浓度的标记蛋白提供了基础。也就是说,对于给定亲和力的抗体,其灵敏度为免疫测定将由测定背景决定,SiMoA的高标记灵敏度有助于降低这种背景。对照实验表明,数字ELISA的背景来自于检测抗体和酶的非特异性结合(NSB)与捕获珠表面结合(补充表2)。AsSiMoA相比传统检测方法具有更高的标记灵敏度,明显减少了检测抗体(~1nM)和酶标记物(1–50pM)的需要,以检测结合事件,与传统方法相比(标记试剂浓度~10nM)。降低的标记物浓度减少了NSB到捕获表面,从而导致背景信号明显降低。 芯弃疾JX-8B单分子普惠化ELISA检测产品,超敏检测,理论可达飞克级;单分子蛋白数字ELISA极速检测
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它是一种DVD大小的圆盘,由24个阵列组成,每个阵列包含240微米大小的微孔,这些微孔呈径向排列,以便使用蓝光制造工艺和仪器内的液体处理并行处理。图2B显示了集成阵列及其相关流体通道的设计。每个阵列由216,000个40飞升大小的微孔组成,以六边形紧密排列模式排列在平面表面的3×4毫米区域内。每个微孔的标称尺寸为4.25µm直径、3.25µm深度和8µ米中心间距。流体通道深0.5毫米,通道和流体入口端口的总体积为74µLto,可容纳珠子和密封油溶液。通道中包含一个收缩部分以减少液体回流。微珠的分级是西莫亚技术的关键要求,微孔的几何形状足以容纳单个微珠(2.7µmdiameter;以下简称珠子)。西莫亚圆盘由环烯烃共聚物(COP)制造,因其具有高通量注塑成型的适应性,且成本低廉。具有良好的化学、生物和光学性能 芯弃疾数字ELISA多重检测芯弃疾JX-8B单分子普惠化ELISA检测产品,微量检测,使用微量样本就能测试;
芯弃疾JX-8B数字ELISA产品每个生物实验室都用得起的单分子免疫检测我们的方法利用了亚飞克尔反应室阵列(图1C)我们称之为单分子阵列(SiMoA)——可以分离和检测单个酶分子20-24。这种方法借鉴了Walt等人20-23的工作阵列用于研究单个酶的动力学和抑制作用。我们的目标是利用捕获和检测单个酶的能力来检测用酶标记的单个蛋白质分子。在这个单分子免疫测定的第一步(图1A),在微球(直径μm)上形成一个三明治抗体复合物,结合的复合物用酶标记,如同常规的基于微球的ELISA。当测定含有极低浓度蛋白质的样品,蛋白质的比值分子(以及由此产生的酶标记复合物)与微球的比例很小(通常小于1:1),因此含有标记免疫复合物的微球百分比遵循泊松分布,导致单个微球上存在单一免疫复合物。例如,如果在(3000个分子)的蛋白质中捕获并标记了50μM的蛋白质,并且在200,000个微球上进行标记,则珠子,然后,。无法检测到这些低数量的酶使用标准检测技术(例如,平板阅读器)的标签,因为荧光染料由每种酶生成的产物扩散到一个大卵试验体积(通常为),并进入其中需要数十万种酶标签才能产生高于该水平的荧光信号背景。
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单分子酶检测到的比较低酶分子数假设蛋白质检测分析的更终灵敏度为背景信号可能由非特异性相互作用产生。为了评估内在敏感性,我们通过将400,000个带有生物素的珠子与不同浓度的酶缀合物链霉亲和素-阝-半乳糖苷酶(S阝G)混合,创建了具有明确酶与珠子比例的珠子群体。为了方便起见,生物素化珠子是通过将生物素化DNA与功能化的珠子杂交提供的。互补DNA。[我们注意到,该实验不应被视为敏感的DNA检测;该检测的敏感性受到非特异性相互作用的限制,如补充图2所示,这些相互作用发生在酶缀合物和表面结合的DNA之间。 芯弃疾JX-8B数字ELISA,每个生物实验室都能用的单分子检测;
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根据目标蛋白的抗体制备了功能化的微球生产商说明。含有目标蛋白的100-μL测试溶液与200,000个磁珠悬浮液孵育2小时至23°C。然后将磁珠分离并用PBS和0.1%Tween-20洗涤三次。磁珠重新悬浮后与含有检测抗体(通常约为1nM)的溶液孵育45分钟。在23°C下最小值。然后将珠子分别用PBS和0.1%洗涤三次。Tween-20。将珠子与含有SβG(1–50pM)的溶液在23°C孵育30分钟,然后分离并在PBSand0.1%Tween-20中洗涤六次。随后将珠子重悬于10μLofPBS中,并加载到飞升液位阵列中。整个实验的总时间约为~6小时。 芯弃疾JX-8B单分子ELISA检测产品,微量样本实现多重快速检测!生物实验室数字ELISA检测通量
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光纤束购自SchottNorthAmericaouthbri,非增强型光泽硅片购自SpecialtyManufacturing(Saginaw,NatBiotechnol.作者手稿;可在PMC2010年12月1日获得。Rissin等人,第7页盐酸、无水乙醇和分子生物学级别的吐温-20均购自西格玛-奥德里奇(圣路易斯,密苏里州)。2.7-μm-二羧基磁珠购自瓦里安公司(加利福尼亚州莱克福斯特)。单克隆抗人TNF-α捕获抗体、多克隆抗人TNF-α检测试剂和重组人TNF-α均购自R&DSystems(Minneapolis,MN)。单克隆抗PSA捕获抗体、单克隆抗PSA检测试剂和纯化的PSA购自BiosPacific(埃默里维尔,加利福尼亚州);使用标准方法将检测试剂抗体生物素化。1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基磺基琥珀酰亚胺(NHS)和SuperBlock®T-20封闭缓冲液购自ThermoScientific(Rockford,IL)。纯化DNA购自综合DNA技术公司(Coralville,IA)。 单分子蛋白数字ELISA极速检测