芯弃疾JX-8B数字ELISA产品
每个生物实验室都用得起的单分子免疫检测
由于活性珠子的百分比接近50%(酶与微球的比例大于~1:1.5),然而,使用图像分析软件区分“开启”和“关闭”孔变得具有挑战性,我们达到了数字动态范围的实际上限。例如,图2中7fM(~45%活性)的信号偏离了线性。因此,这里使用50,000个孔展示的数字线性动态范围是从3.5fM到350zM,即大约四个对数单位。前提是蛋白质使用适当的酶浓度进行标记,这种动态范围对于许多临床应用来说是足够的 芯弃疾JX-8B单分子小型化ELISA检测产品,低成本单分子检测;单分子蛋白数字ELISA极速
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我们已经开发了两种临床相关蛋白的检测方法——前列腺特异性抗原(PSA)和肿瘤坏死因子α(TNF-α),以确定高酶标记物单体提供的灵敏度转化为高灵敏度的检测方法血液中的蛋白质。两种蛋白质的数字ELISA如图1所示。开发这些试验的关键参数是:珠子浓度和两种标记试剂(检测试剂和酶偶联物)的浓度。珠子浓度的选择取决于几个相互竞争的因素。首先,足够的珠子必须在场以从热力学和动力学中捕获大部分目标分析物从热力学角度看,100μL中有20万个珠子,每个珠子大约有8万个与之结合的抗体25相当于约0.3nM的抗体浓度,在该浓度下,抗体-蛋白平衡导致高捕获效率(>70%)(D.M.R.,E.P.F.,D.C.D.,未发表工作)。 什么是数字ELISA灵活芯弃疾JX-8B单分子小型化ELISA检测产品,每个生物实验室都能用的单分子检测;
芯弃疾JX-8B数字化高灵敏ELISA芯片检测产品;应用范围:各种高灵敏多重免疫检测,可替代各种ELISA试剂盒,及其他免疫检测产品。
生物实验室、医学实验室常见问题:ELISA使用繁琐、用时长、样本用量大、使用不够灵活。使用方法比较繁多,用时长,每次检测可能要花几个小时,经常半天就测试了一轮工艺;如果要根据结果来改善,就得再花上半天、一天;使用和实验安排不够灵活。ELISA试剂盒每次购买和使用,大多都要以整版方式进行,不够灵活。
芯弃疾JX-8B数字化高灵敏ELISA芯片检测产品,与sioma产品的区别:
simoa产品为什么很难普及:主要问题:效果好、但成本高、平台庞大、不灵活、不开放;大部分实验室买不起设备!即使公用平台上了设备,大部分课题组也用不起耗材试剂!仪器:巨大,价格>300万;芯片+试剂:每套1万元以上;
Simoa的技术方案很难小型化,大部分反应流程都在芯片外进行,必须依赖大型自动化设备,与大部分生物实验室、医学实验室的灵活、低成本使用场景不符。 5)数字化高敏ELISA芯片试剂盒,微量样本可同时测2-4个指标;
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动力学上,对于200,000个微球分散在100μL中,珠子之间的平均距离约为80μm。大小为TNF-α和PSA(分别为17.3和30kDa)的蛋白质将在不到1min的时间内扩散80μm。表明,在2小时的孵育过程中,蛋白质分子的捕获不会受到限制动力学上。其次,必须有足够的珠子被加载到阵列上以限制泊松噪声。200,000个珠子加载到50,000孔阵列中,通常会导致20,000–30,000个微球被困在1mL孔中。对于典型的背景信号为1%活性微球(见下文),这种装载导致背景信号为200-300个活性微球检测到,对应于泊松噪声的可接受变异系数(CV)为6-7%。第三,过高的微球浓度可能导致:a)非特异性结合增加,降低信噪比;以及b)分析物与微球的比例过低,导致活性微球的比例过低,从而导致泊松噪声引起的高CV。这些因素的平衡NatBiotechnol.作者手稿;可在PMC2010年12月1日获得。Rissin等人第5页因素意味着每100μLoftest样品含有20万到100万颗珠子是比较好的数字ELISA。同时,为了获得可接受的背景信号(1%)和泊松噪声)。 芯弃疾JX-8B单分子小型化ELISA检测产品,多重检测,同一样本就能测试2-6项指标;高灵敏的数字ELISA准确宽
4)数字化高敏ELISA芯片,微量样本实现多重快速检测!单分子蛋白数字ELISA极速
芯弃疾JX-8B数字ELISA,每个生物/医学实验室都用得起的单分子免疫检测;
单分子的检测原理:由Simoa数字免疫分析法实现的超灵敏度已在先前讨论过。简而言之,类似免疫分析中的酶-底物反应是在相对较大的反应体积(50-100µL)中进行的,在信号生成步骤中稀释了产物分子。信号分子的扩散和稀释将灵敏度限制在皮摩尔范围内。相比之下,Simoa通过将单独标记的免疫复合物和底物限制在飞升大小的孔中,从而限制了荧光产物分子从酶-底物反应中的扩散。当单一酶标签催化底物转化为荧光产物时,产生的荧光团被限制在孔中,从而在短时间内产生可测量的荧光信号。单分子蛋白数字ELISA极速