上海微流控芯片数字PCR解决方案

       数字PCR也叫Digital PCR（dPCR），是近几年发展起来的一种核酸定量分析技术。相较于传统荧光定量PCR来说，数字PCR对结果的判定不依赖于扩增曲线循环Ct值，不受扩增效率的影响，能够直接读出DNA的分子个数，能够对起始样本核酸分子***定量。

       数字PCR基本原理是将一个样本分成几十到几万份，然后再将其分配到不同的反应单元中，使每个微滴单元包含一个或多个拷贝的核酸分子（即DNA模板），每个单元都会对目标分子进行扩增，然后再对每个单元进行荧光信号的统计并计算。相对而言，传统PCR或qPCR反应都是发生于同一体系当中，这也是数字PCR与其比较大的区别。 液体活检：早筛、用药、监测、复发。上海微流控芯片数字PCR解决方案

**个体化诊疗

通过检测T790M位点突变情况，可以更好地评估一代TKI***的疗效及耐药情况并指导第三代TKI靶向药Osimertinib的使用。然而，由于qPCR平台ARMS检测技术的灵敏度有限，没有办法在含大量EGFR基因野生型背景核酸中高效准确的检测到T790M突变。这个时候dPCR技术展现出了****的检测精度，此外，dPCR***定量的优势也能充分发挥出来了，可以监控突变含量变化，做到及早发现耐药。

2.）基因表达分析

伊马替尼（Imatinib）可以有效帮助很多慢性髓细胞白血病（CML）患者延长生存期，但是临床上发现，伊马替尼的疗效与BCR-ABL1融合基因的转录产物表达量有很大的关系。研究人员采用dPCR对CML患者的BCR-ABL1融合基因转录产物进行测定，结果检测下限可以达到0.001%，显示出dPCR在痕量核酸检测方面比qPCR具有无可比拟的优势 宁波广州永诺数字PCR代理商分辨率——低至0.1倍基因表达差异。

dPCR的基本原理

       目前dPCR主要有两种形式，芯片式和液滴式，但基本原理都是将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中，每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后，有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器就没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积，就可以推算出原始溶液的核酸浓度。可以使用几种不同的方法来分配样品，包括微孔板，毛细管，油乳剂和带有核酸结合表面的小型化腔室阵列。样品的分配使人们可以通过假设分子种群遵循泊松分布来估计不同分子的数量，根据泊松分布的原理，反应体系中目标分子的拷贝数可以通过公式A=-ln[(N-X)/N]*N计算，从而解决了多个目标分子存在于单个液滴中的可能性。

与常规PCR方法相比，数字PCR有如下优势：

       1、能够完全定量：常规PCR定量需要制定已知拷贝数的标准DNA曲线，但是由于待检样本与标准曲线不在统一体系，条件上会存在差异，另外加上PCR扩增效率的差异从而影响定量结果的准确性。而数字PCR不受标准曲线和扩增动力学影响，可进行完全定量。

       2、样本需求量低：适用于珍贵样本或核酸降解严重的样本

       3、灵敏度高：数字PCR是将传统PCR反应体系分割成数万个**PCR反应，这些反应可以精确地检测很小的目的片段差异、单拷贝甚至低浓度的混杂样本。且能避免非同源异质双链的形成。

       4、高耐受性：由于目的序列被分配到多个**反应体系中，明显降低了背景信号和yì zhì物对反应的干扰，扩增基质效应大大减小。

高灵敏度——数字PCR的灵敏度与同体积反应体系的分割份数成正比。

       数字PCR是一种核酸分子***值定量技术，能够直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的***值定量。该试剂盒采用创新的一步法逆转录数字PCR技术，将*****的RNA逆转录及数字PCR扩增整合到一个反应体系，单管双检同时测定*****的两个**基因，消除***变异带来的漏检风险。

       MicroDrop-100全新微滴式数字PCR系统为永诺生物旗下子公司永诺医疗自主研发的检测设备，此系统检测无需依赖标准物质，可达到***定量，具有超高灵敏度，检测灵敏度高达1个拷贝，且具有较好的重复性，降低同样本不同批次的检测差异。数字PCR结果采取终点判读法，相比荧光定量PCR的过程性读取可有效降低对PCR 扩增效率的依赖、降低PCR***物对检测结果的影响，对于复杂样本也能提供稳定的检测结果等特点，在******临床实验及***患者的治疗过程中可发挥重要作用。 MicroDrop™数字PCR平台是由永诺生物自主研发并已投入生产的微滴式数字PCR检测系统。上海微流控芯片数字PCR解决方案

无创产前筛查：低成本、快速。上海微流控芯片数字PCR解决方案

       数字PCR（Digtal PCR）是一种核酸定量精密检测的新兴技术手段，于20世纪由Vogelstein等提出。它是将稀释后的核酸模板分配到大量不同的反应单元中，使每个反应单元中有一个或没有核酸。利用PCR扩增的同时，加入可检测荧光。待扩增结束时，使用统计学方法采集每个反应单元出现的荧光次数，从而定量检测样本中的核酸浓度。

       基于分液方式的不同，数字PCR主要分为3种：微流体数字PCR(Microfluidic digital PCR，mdPCR)、微滴数字PCR(Droplet digital PCR，ddPCR)和芯片数字PCR(Chip digital PCR，cdPCR)。

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