数字PCR（Digtal PCR）是一种核酸定量精密检测的新兴技术手段，于20世纪由Vogelstein等提出。它是将稀释后的核酸模板分配到大量不同的反应单元中，使每个反应单元中有一个或没有核酸。利用PCR扩增的同时，加入可检测荧光。待扩增结束时，使用统计学方法采集每个反应单元出现的荧光次数，从而定量检测样本中的核酸浓度。

基于分液方式的不同，数字PCR主要分为3种：微流体数字PCR(Microfluidic digital PCR，mdPCR)、微滴数字PCR(Droplet digital PCR，ddPCR)和芯片数字PCR(Chip digital PCR，cdPCR)。 检测数量一次可达96个样品。流式数字PCR代理商

研究方向

无创产前筛查

无创伤的产前诊断, 如21号染色体为3倍体的唐氏综合征、已知父母基因型的胎儿地贫检测或已知父母基因型的其它核酸病检测(孟德尔相关遗传疾病)。目前标本来源主要为血液，而待检测的胎儿DNA受到母体DNA的干扰，影响了检测的准确性。而QX200检测系统独特的微滴化技术完全可以作为二代测序法的补充来进行的无创伤产前诊断，从而提高工作效率及节约成本。

转基因食品或成分的检测

目前在确定转基因作物或成分的含量时采取定量PCR的标准曲线法，这种方法需要依赖于已知浓度的标准品(Certified Reference Materials Calibrants, CRMCs)。ddPCR***定量的方式可以彻底解决这些标准物质的定标工作。 杭州永诺数字PCR销售电话采用微滴式技术高达100,000个的微滴。

要了解为什么传统 PCR 存在限制，务必要了解 PCR 反应过程中发生了什么。基本 PCR 运行可以分为三个阶段：

指数期

每个循环积聚的产物准确加倍（假定 ** 反应效率）。该反应具有高度特异性和精确度。出现指数式扩增，因为所有试剂均新鲜可用，反应的动力学推动反应有利于扩增子加倍。

线性期（高变异性）

随着反应继续，一些试剂因扩增而被消耗。反应开始减缓，并且每个循环的 PCR 产物不再加倍。

平台期（终点：使用传统方法进行凝胶检测）

反应停止，不再产生更多产物，并且如果放置时间够长，PCR 产物将开始降解。因为每个样品具有不同的反应动力学，所以每支试管或每个反应将在不同的时间点进入平台期。在平台期可以看到这些差异。在平台期内，传统 PCR 进行测量，又称为终点检测。

与常规的PCR的方法相比，dPCR有很好的优势。

***定量

常规PCR和实时荧光PCR定量检测都需要已知拷贝数的标准DNA制定标准曲线，由于样品测定在各种条件上不会完全一致，会造成PCR扩增效率的差异，从而影响定量结果的准确性。而ddPCR不受标准曲线和扩增动力学影响，可以进行***定量。

样品需求量低

在检测珍贵样品和样品核酸存在降解时具有明显的优势。

高灵敏度

ddPCR本质上是将一个传统的PCR反应分成了数万个**的PCR反应，在这些反应中可以精确地检测到很小的目的片段的差异、单拷贝甚至是低浓度混杂样品，且能避免非同源异质双链的形成。

高耐受性

由于目的序列被分配到多个微滴中，***降低了体系间的影响以及背景序列和***物对反应的干扰，扩增基质效应大大减小。 CRISPR-Cas9基因编辑结果验证。

研究方向

基因表达差异研究

检测时完全不依赖传统的Ct值即可实现真正意义上的***定量，从而提供了比实时荧光定量PCR更精确的基因差异表达研究，尤其对于那些靶基因表达差异微小的情况：microRNA、lncRNAs等的表达分析、等位基因的不平衡表达、单细胞基因表达分析、Exosome内核酸分子定量分析等。

拷贝数变异(CNV)研究

微滴化的样品处理及检测，这种摆脱Ct值的计算方法而直接获取目标基因的***拷贝数，为拷贝数变异的研究提供了***的检测精度。是其他诸如二代测序、芯片杂交等平台无法达到的，因此采用数字PCR能够有效对NGS、aCGH的实验结果进行验证，并具有成本低、通量高的特点。

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