细胞实验外包就找英瀚斯。细胞培养过程中注意要点,提前预定超净台,减少复苏后插在冰盒里等待的时间,可避免细胞房人满为患,超净台使用紧张,复苏1h后,还没有加入新的培养液。(高浓度DMSO防止胞内形成冰晶,冻存时保护细胞,但复苏融解后,浸泡时间太久会对细胞有毒性)。细胞解冻时,由于冻存管管壁较厚、隔热,而导致水浴时间太长(2min还没融化)时,可以将水浴锅的温度调至40℃左右,可以缩短解冻时间。DMSO能够快速穿透细胞膜进入细胞中,降低冰点、延缓冻存过程,同时提高细胞内的离子浓度、减少细胞内冰晶的形成,从而减少细胞损伤程度。细胞实验外包目前是广大科研用户比较好的选择。江西生物细胞实验外包检测
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做RIP的时候和beads孵育的lysate的浓度如何确定?有些动物的文献提到用细胞板数细胞个数,想知道如果用蛋白浓度的话,大概在什么数量范围的蛋白总量对应50ulBEADS?细胞实验外包。50ulbeads对应的是一个reaction,而我们推荐一个reaction是100ul裂解上清(2×107cells加入100ulRIPlysisbuffer得到),所以只需要在裂解前计数一下,并按括号中的比例加入裂解buffer,后续100ul裂解上清就是一个reaction的蛋白用量。不建议通过裂解后测蛋白浓度的方法进行配比。细胞实验外包实验结果怎么看?江西生物细胞实验外包检测
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因为RIP做完得到的是RNA序列,要做后续检测,比如测序、判断目标序列位置等,是不是都必须要做RT-PCR,得到逆转录的DNA后,后面就跟ChIP相同了?细胞实验外包。常见的用realtimeqRT-PCR。如果对照的目的是保证两个样品间加入的细胞量一致或者进行定量,理论上说,使用input作为判别,计算不同样品上样量的差异。如果对照的目的是为了看IgG以及目的抗体富集的非特异性mRNA的量的话,那么可以找一个确定不会与目的抗体结合的RN**段设计primer进行qPCR,用来看IgG以及目的抗体拉下来的背景情况。RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用,但由于研究对象是RNA-蛋白复合物而不是DNA-蛋白复合物,RIP实验的优化条件与ChIP实验不太相同(如复合物不需要固定,RIP反应体系中的试剂和抗体相对不能含有RNA酶,抗体需经RIP实验验证等等)江西生物细胞实验外包检测
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