HE染色分化作用：染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中用0.5%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木精的醌型结构，使组织与色素分离而褪色。经苏木精染色后，必须用0.5%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木精染料和细胞浆吸附的苏木精染料脱去，在进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。因此，在HE染色中分化是极为关键的一步。返蓝作用：分化之后，苏木精在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色，在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经0.5%盐酸乙醇分化后呈红色或粉红色，故分化之后，立即用水出去组织切片上的酸而终止分化，再用弱碱性水（0.2%氨水）使苏木精染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。HE染色规范化流程以及注意事项。山西病理HE染色
HE染色注意事项：1．组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则无论进行那种染色都会发生困难。脱蜡时间要充分，若溶蜡剂使用过久应及时更换以免效率降低，若室温过低，可将溶蜡剂置于温箱中进行脱蜡。 2．苏木素染液使用一段时间后表面易出现亮晶状飘浮物，这可能是液体表面的过氧化物，必须过滤除去，以防沉渣污染组织切片。苏木素液一般染过三、四百张切片后，着色力会减弱，着色不鲜艳，呈灰蓝色时应及时更换新液。 3．染色的时间长短需依据：染剂对组织的染色作用，室温条件，切片厚薄，固定液的类别，染液的新旧而进行调节。所以在染色时必须使用显微镜观察染色程度以利掌握时间。 4．分化十分重要。分化步骤的准确也是染色成败的关键，若分化失当则必然引起染色不匀或过淡，过深等现象，因此分化后一定要镜检，观察胞核是否清晰，胞浆呈淡白色。否则需再次分化，不然一旦复染后，组织会呈紫蓝色即“蓝盖红”现象。 5．还原液不宜过浓，若碱性太强易使组织脱落故以淡为宜。 6．伊红宜淡染，复染过深胞核会不清晰，影响镜检。 福建比较好的HE染色服务HE染色是组织学、病理学教学与科研中比较基础、使用比较普遍的技术方法之一。
HE染色等常规染色，组化或是荧光优先推荐做石蜡切片。原因：石蜡切片对组织的形态保存比冰冻切片好，并且对抗原基本无影响。脂质染色（油红O染**odipy染色，尼罗红染色）必须做冰冻切片，不能做石蜡切片。以下染色必须要新鲜或冷冻组织冰冻切片：ROS染**-半乳糖甘酶染色，ATP染色，胆固醇染色。如果标本已经放在-80°冰箱冷冻了之后又想要做石蜡切片，将标本取出来千万不要解冻直接放于固定液内固定（在固定液内边解冻边固定）。组织形态结构保存完好顺序：新鲜组织立即投入固定液内固定石蜡切片＞组织-80°冷冻后投入固定液内固定石蜡切片＞新鲜组织立即投入固定液内固定冰冻切片＞组织-80°冷冻后直接冰冻切片。
HE染色全名苏木精—伊红染色法，属于化学染色法，其主要依靠苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。实验过程：1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min，自来水洗。2、苏木素染色：切片入苏木素染液染3-5min，自来水洗，分化液分化，自来水洗，返蓝液返蓝，流水冲洗。3、伊红染色：切片依次入85%、95%的梯度酒精脱水各5min，入伊红染液中染色5min。4、脱水封片：切片依次放入无水乙醇I5min-无水乙醇II5min-无水乙醇Ⅲ5min-二甲Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min透明，中性树胶封片。5、显微镜镜检，图像采集分析。结果判读：细胞核呈蓝色，细胞质呈红色HE染色取材、染色以及分析方法介绍。
HE染色骨组织的处理方式：组织里存有钙盐可妨碍用常规方法制作良好切片。骨组织及钙化病灶，经过固定后，需要先将钙盐除去使组织软化，才能进行常规切片。如果脱钙不全，则切片容易撕开或碎裂，损伤切片刀刀刃。脱去钙盐的过程，称为脱钙。骨组织固定24小时后，锯下不超过0.5cm厚的薄骨片，以4%甲醛溶液固定后，进行脱钙。骨组织过厚则需延长脱钙时间，但长时间浸于强酸会影响切片染色效果。取材骨组织固定于10%甲醛溶液24小时后再锯取厚度约0.5cm骨片固定以10%甲醛溶液固定2天脱钙将组织置于脱钙剂中，每日更换新鲜液，直至组织软化为止除酸流水冲洗24小时脱水、浸蜡、切片进行常规脱水、透明、浸蜡、切片南京英瀚斯，专业的病理染色实验服务平台。常用HE染色试剂配制方法。福建比较好的HE染色服务
冰冻组织切片的HE染色。山西病理HE染色
HE染色注意事项：1、染色时调节pH值很重要。如果组织块在福尔马林中固定时间长，组织酸化而影响细胞核着色。因此，要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min，这样可以使细胞核着色较深。染伊红时胞浆着色不佳，可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。2、切片染苏木精后，分色这一步是关键，应在显微镜下控制进行，一般以细胞核染色清楚（晰）而细胞质基本无色为佳。如果过分延长分色时间将导致染色太浅，应重新染色后再行分色。3、切片经酒精脱水后，入二甲苯时可出现白色不透明状态，此为脱水不彻底，应将切片退回无水酒精，更换酒精、二甲苯，以求彻底脱水与透明。4、在染色过程中不要让切片干燥，以免切片收缩、变形，影响神经元形态。5、切片从二甲苯取出或进入二甲苯前，切片周边均应擦干净或吸干多余水分。6、***封固时，要用中性树脂，防止日后褪色，盖片要选大于组织块的面积，如漏出一部分不久将会褪色，所用树脂浓度要适当，树脂封固时不能有气泡。山西病理HE染色
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