免疫组化如何比较大限度地降低组织非特异性染色?
(1)缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是重要的一条。
(2)一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色,建议试用单克隆抗体看看。
(3)内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织),需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色;
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(4)非特异性组分与抗体结合,这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果;
(5)缩短DAB孵育时间或降低DAB浓度/过氧化氢浓度等;
(6)适当增加PBS冲洗次数和浸洗时间,在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤为重要;
(7)防止标本染色过程中出现干片,这容易增强非特异性着色。 大鼠、小鼠组织免疫组化,找英瀚斯生物。黑龙江靠谱免疫组化要多久
免疫组化实验流程介绍:
英瀚斯生物为您整理总结免疫组化详细步骤:
1、SP三步法
1)石蜡切片,常规脱蜡至水。
2)0.3%或3%H2O2去离子水(无色液体)孵育10-30分钟,以灭活内源性过氧化物酶活性。
3)蒸馏水冲洗,PBS浸泡5分钟
4)候选步骤:采用抗原修复:微波(建议30分钟内4次中火)、高压、酶修复方法。自然冷却,再用3分钟×3次.
5)血清封闭:室温15-30分钟,尽可能与二抗来源一致。倾去,勿洗。
6)滴加适当比例稀释的一抗,37℃孵育2~3小时或4℃过夜(比较好复温)。PBS冲洗,3分钟×5次。
7)滴加生物素标记的二抗,室温或37℃孵育30分钟-1h。
8)PBS冲洗,3分钟×5次。
9)滴加SP(链霉亲和素-过氧化物酶),室温或37℃孵育30分钟-1h。
10)PBS冲洗,3分钟×5次。
11)显色剂显色(DAB等)。
12)自来水充分冲洗。
13)可进行复染,脱水,透明。
14)选择适当的封片剂封片。 青海做得好的免疫组化是什么免疫组化检测多少钱?
免疫组化染色切片的好坏直接影响着病理医生对其染色结果的判断,进而影响病理诊断,所以制作一张良好的免疫组化切片至关重要,它需要病理医生与病理技师两者间的相互协调,密切配合和共同努力,病理医生选择抗体,设置对照,判读结果,指导技术;而技术人员进行实验操作,保证染色质量。在免疫组化切片的制作过程存在多个环节,每一环节的失误都可能影响检测结果,如抗原保存,蛋白酶消化,增强技术及对抗体的管理、使用和试剂的浓度等等,因此制作一张高质量的免疫组织化学切片是多方面相互配合的结果。
免疫组化指的是根据抗体与抗原特异结合的原理来检测组织切片中的抗原(如蛋白)。immuno的词根来自操作中所使用的抗体,而histo意味着组织。另一种类似的技术是免疫细胞化学(Immunocytochemistry,简称ICC)。这两个词大家经常混着用,看着好像差不多,但实际上还是有点区别。IHCvsICC对于IHC,组织是来自患者或动物,经过冷冻或石蜡包埋。将这些组织制成约4μm厚的切片,封片后再处理。通过这种方法,研究人员可观察细胞组分的定位,同时维持周围组织的原先结构。对于ICC,大部分细胞外基质及其他基质组分被去除,只剩下整个细胞来染色。ICC的来源可以是细胞悬液,来自患者或动物(如血涂片、拭子等),或在实验室中进行的组织培养细胞系。 英瀚斯生物做免疫组化怎么样?
免疫组化分类中免疫酶标方法,英瀚斯生物为您介绍。免疫酶标方法是继免疫荧光后,于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前定位准确、对比度好、染色标本可长期保存,适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速,已经衍生出了多种标记方法,目前在病理诊断中广为使用的当属PAP法(过氧化物酶-抗过氧化物酶)、ABC法(卵白素-生物素-过氧化物酶复合物)、SP法(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶)、即用型二步法(聚合物链接)等。免疫组化可以看什么?黑龙江靠谱免疫组化要多久
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免疫组化技术应用于临床cancer良恶性的判断,英瀚斯生物为您介绍。对于反应性增生还是cancer性增生,可用免疫球蛋白(Ig)的轻链抗体检测B淋巴细胞增生的单克隆或多克隆性来区别。在滤泡反应性增生时,滤泡反应中心的细胞不表达细胞凋亡蛋白(bcl-2),bcl-2阴性;而在滤泡性淋巴瘤中,由于90%以上cancer性滤泡细胞有bcl-2的高表达,bcl-2阳性。而增殖细胞核抗原(PCNA),周期素(Cycling),核抗原(Ki-67)通过对cancer细胞增生的程度作出评价,从而提示增生细胞的良恶性。黑龙江靠谱免疫组化要多久
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