病毒核酸检测过程中,病毒保存液的作用尤其重要,我们的检验工作不可能在采集到样本后就立马进行检测,从采集完样品到开始检测,中间可能遇到各种问题,比如异地运输或邮寄标本,或样品太多无法按时进行检测等等,这时病毒保存液就起到了相当大的作用。病毒保存液分为灭活型和非灭活型,那么我们一般选用哪种比较好呢?
灭活型:病毒和细菌受理化因素作用后失去性,称为灭活(inactivation)。 多数病毒比细菌更容易被灭活。这也使得病毒的长期保存通常比细菌的保存更困难。其实大多数病毒耐冷不耐热,对热不稳定。55—60℃,通常在数分钟内,病毒的衣壳蛋白就会发生变性,使病毒失去能力。这可能是因为此时的病毒已失去了对正常细胞的吸附能力和/或脱衣能力。病毒存在不易保存和易的弊端,但灭活型病毒保存液完美解决了这一弊端。
从采集完样品到开始检测,中间可能遇到各种问题,比如异地运输或邮寄标本。河源支原体保存液
而不灭活的可以主要是以运送培养基为基础改良的病毒维持液型保存液。它能够保持病毒在体外的活性以及抗原和核酸的完整性,保护病毒蛋白质外壳不易分解,较大程度地保持了病毒样本的原始性。这种保存液除了用于核酸提取检测外,还能用于病毒的培养、分离以及抗原的检测等,但是采样后长时间保存需要保持严格低温。
对于不同的检测目的,需要选择不同的病毒采样管,目前使用的这两种病毒采样管各有特点。为了满足不同的检测要求,以及不同的病毒检测实验室条件,采样不同的病毒采样管是非常有必要的。但是需要注意的是:不管是灭活型还是非灭活型,在采样之前的病毒采样管都必须严格灭活杀菌,保证管内没有其他微生物,致使采样后病毒分解或其它影响造成错误检测。拭子取样后,如果使用质量欠缺的采集工具或保存液,会影响后续的检测结果甚至造成误诊的假阳性,因此一定要选择具有专业资质厂家生产的病毒采样管。 江门保存液****针对这种情况,抗疫非常需要能直接灭活病毒的样本保存液,这样可以较大提高样本采集、运输过程中的安全性。
市场上使用的病毒保存液主要有两种,一种是以运送培养基为基础改良的病毒维持液,另一种则为核酸提取裂解液改良的保存液。
前者的主要成分是Eagle's基础培养液(MEM)或Hank's平衡盐,添加了病毒生存所需的盐类、氨基酸、维生素、葡萄糖以及蛋白质,这种保存液使用酚红钠盐做为指示剂,溶液pH值在6.6-8.0时溶液呈粉红色。保存液中添加了必须的葡萄糖、L-谷氨酰胺和蛋白质,蛋白质的提供形式有胎牛血清或牛血清白蛋白,可以稳定病毒的蛋白质外壳。由于保存液营养成分丰富,有利于病毒的成活但是也有利于细菌的生长,如果保存液中污染了细菌,则会大量繁殖,其代谢产物中的二氧化碳会使保存液pH值下降,从粉红色变为黄色。因而大多数厂家都在配方中添加了抑菌剂成分,推荐使用的抑菌剂为青霉素、链霉素、庆大霉素及多粘菌素B等,不推荐使用叠氮钠、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(MCI)和
5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(CMCI)等抑制剂,因为这些组分对PCR反应有影响。由于这种保存液提供的样本基本是活病毒,可以很大程度保持样本的原始性,后续不仅可以用于病毒的核酸提取检测,还能用于病毒的培养和分离。但是用于检测时应该注意的是必须灭活以后再进行核酸提取纯化。
深圳美迪科的非灭活病毒保存液与市场上其他厂家相比较而言,不仅添加了病毒所必须的Hanks缓冲液来构建中性环境,还添加了牛血清白蛋白(BSA)作为蛋白质稳定剂,可保护病毒的蛋白质外壳,使其不易分解,获得的DNA/RNA质量好,能得到较快的检测结果,可完成各种病毒检测及分析实验,如PCR、qPCR等,同时节省运输成本,有需求的客户可以提供样品寄送等服务,美迪科一直相信,只要一直坚持做好的产品,使其很大程度满足客户的需求,肯定能在客户反复对比厂家后,惊喜的发现选择美迪科是不会错的。由于病毒属于寄生生物,采样后体外就无法存活了,如果不能及时检测,就需要放入病毒保存液中进行保存。
灭活型病毒保存液可以对新鲜的临床病毒标本进行蛋白变性而起到病毒灭活作用,杜绝二次传播,保障运输及检测人员的安全。已灭活的样本可以搭配搭配多种病毒提取试剂盒进行使用,核酸提取仪快速提取核酸,同时配合呼吸道病原体PCR检测试剂盒实现快速检测,特异性灵敏度均不受影响。
病毒保存液具有很多功能:
①、操作简单,液体内含有能让蛋白变性的成分,从而起到病毒灭活的作用;
②、内含抑制剂,更大程度地保护病毒核酸稳定不被降解,大幅度提高核酸提取率;
③、产品采样前可常温保存12个月,采样后样本可常温保存一周,密闭性好,方便保存运输,节省运输成本。
不然病毒核酸会很快降解就无法检测到核酸了所以就需要往采样管里加保存液来让病毒的核酸不要那么快被降解。浙江细胞保存液批发价格
病毒保存液的质量,是提高PCR检测阳性率与病毒分离阳性率的关键因素,从根本上决定了病毒采样管的质量。河源支原体保存液
制造保存管的材质应注意选择,有资料提示聚丙烯(Polypropylene)与核酸的吸附有关,特别是在高张力离子浓度时,聚乙烯塑料(Polyethylene)比聚丙烯(Polypropylene)更容易抓住DNA/RNA。聚乙烯-丙烯聚合物(Polyallomer)塑胶与某些特殊处理的聚丙烯(Polypropylene)塑胶容器更适合做DNA/RNA的储存使用。另外,在使用可折断拭子时,保存管应尽量选择高度大于8厘米的容器,以防止在折断拭子时内容物外溅污染。
生产保存液的水:生产保存液使用的超纯水应经过分子量为13,000的超滤膜过滤,以保证去除生物来源的聚合物杂质,例如RNase、DNase和内,不推荐使用普通纯化水或蒸馏水。 河源支原体保存液
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