PCR出现假阳性的原因分析。引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，因而在进行PCR扩增时，扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出现假阳性。需重新设计引物。靶序列或扩增产物的交叉污染：这种污染有两种原因：一是整个基因组或大片段的交叉污染，导致假阳性。这种假阳性可用以下方法解决：①操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样器内或溅出离心管外。②除了酶及其他不耐高温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管均应一次性使用。③必要时，在加标本前，反应管和试剂用紫外线照射，以破坏存在的核酸。二是空气中的小片段核酸污染，这些小片段比靶序列短，但有一定的同源性。可互相拼接，与引物互补后，可扩增出PCR产物，而导致假阳性的产生，可用巢式PCR方法来减轻或消除。英瀚斯生物，分子平台实验人员十年以上经验，专业pcr检测。云南推荐pcr价格
PCR出现非特异性扩增带的原因分析：PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。其次，是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶的量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有：①必要时，重新设计引物。②减低酶的量或调换另一来源的酶。③降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数。④适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性，65℃左右退火与延伸，也叫两步法)。湖北高质量pcr检测pcr检测样本的保存要求与方法？
PCR实验技术中的Touch-downPCR介绍：Touch-downPCR又称降落PCR.即选定一个温度范围，如50—35℃，每降1-2℃进行1-2个循环，然后在50度下进行15个循环。Touch-down的原理随着退火温度的降低，特异性逐步降低，但特异性条带在温度较高时已经扩增出来，其浓度远远超过非特异性条带，随着退火温度的降低，特异性条带优先被扩增。选择初始复性温度的原则起始复性温度应该比引物的Tm值高出5-10度，然后每个循环递减1-2度Touch-downPCR的应用范围lowcopyoftargetedDNA;highdegreedegeneracy(orlessspecific)ofthefirstsetofprimers;
PCR实验技术中的多重PCR（MultiplexPCR））介绍：多重PCR可实现在同一反应管中同时扩增多个不同的片段。多重PCR不仅意味着节约时间、试剂和样本，同时使得多个扩增子进行同时比较成为可能。当一个反应管中存在多个引物对时，如在多重PCR中，非特异性扩增和扩增效率的降低是较关注的问题，因为反应的优化不可能针对所有的引物对和片段。因此，引物的设计至关重要，以减少错配引起的非特异性扩增。引物序列对于目标片段应该是独特的，且所有引物的Tm值差异应在5℃内。在进行多重PCR前，每个引物对应在单个反应中验证其特异性和扩增效率。而且，不同大小的扩增子应在凝胶电泳中可区分开，以便鉴定。除了引物设计和扩增子大小，热启动DNA聚合酶和特殊优化的PCR缓冲液对于多重PCR也是必需的，它们可有助于扩增的成功率和扩增的特异性。做个pcr检测需要多少钱？
PCR实验室设计的中心问题是如何避免污染。在实际工作中，常见的有以下几种污染类型：扩增产物的污染；天然基因组DNA的污染；试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染，实验就必须停止，直到找到污染源为止，而且实验结果必须作废，需重新进行实验。所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐，浪费人力物力。因此要避免污染，首先应是预防，而不是排除。PCR扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。为避免交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。 各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。做pcr检测，每个样本多少钱？陕西细胞pcr要多久
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PCR实验技术中的兼并引物PCR（DegeneratePrimer）介绍：兼并引物是指代替编码单个氨基酸所有不同碱基可能性的不同序列的混合物。兼并度越低，产物特异性越强。设计引物时应尽量选择兼并性小的氨基酸，并避免引物3’末端兼并，因为3'端末尾3个碱基的退火足以在错误位点起始PCR；次黄嘌呤可以同所有的碱基配对，降低引物的退火温度。因此，在引物设计时,比较选择兼并性小的氨基酸，并避免引物3'端被兼并，因为3'端末尾3个碱基的退火足以在错误位点起始PCR;次黄嘌呤可以同所有的碱基配对，降低引物的退火温度。实验证明，用脱氧肌苷引物进行PCR,可以代替编码蛋白的多种兼并密码子中的兼并碱基。云南推荐pcr价格
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