实验失败常见问题分析有哪些：
为什么在显微镜下观察发现所有的切片都成阴性？
答：这种现象主要是由操作不当导致，可能的原因有：1.染色操作不当，致使染色失败；2.漏加一种抗体或者制备出的抗体没有活性；3.缓冲液中有叠氮化钠，抑制了酶的活性；4.复染或脱水剂使用不当等。建议逐一排查，找到原因后重新进行实验。
在显微镜下观察发现所有的切片都成阳性，这是为什么？答：与上一个问题类似，出现的原因也是试验操作存在问题，可能的原因有：1.切片在染色过程中抗体过浓，或者干片了；使用的呈色底物溶液已变色或呈色反应时间过长；3.抗体温育的时间过长等。
在显微镜下观察发现切片的背景很深，这是为什么？答：以下几方面会导致切片的背景过深：1.蛋白质封闭不够或所用血清溶血，造成抗体的非特异性反应；2.内源性过氧化酶没有完全阻断，显色过程中过氧化酶与酶底物反应，造成背景；3.底物呈色反应时间过长或呈色反应后漂洗不彻底。 病理报告中的免疫组化到底有什么作用?内蒙古病理免疫组化怎么选择
在临床应用中，免疫组化还可以进一步分类不同qi官与组织交界处cancer。由于重叠的特征，在一些组织qi官交界处的cancer，只凭组织学基础对cancer进行分类很困难。如胃肠道梭形细胞肉瘤是肌肉起源的平滑肌肉瘤，是间质起源的胃肠道间质瘤(GIST)，还是神经起源的神经鞘瘤;同样发生于组织交界处的cancer有睾丸胚胎cancer与精原细胞cancer，两者较难区别，且医疗与预后明显的不同，但用免疫组化检测角蛋白就较易于区别:角蛋白阴性则为精原细胞cancer，而角蛋白阳性则为胚胎cancer。四川什么是免疫组化要多少钱病理免疫组化多少钱？
英瀚斯生物为您整理免疫组化实验步骤
1、石蜡切片置于65℃烘箱中烘片2h，脱蜡至水，用PBS冲洗三次，每次5min。
2、切片置于EDTA缓冲液中微波修复，中火至沸后断电，间隔10min低火至沸。
3、自然冷却后PBS洗3次，每次5min。4、切片放入3%过氧化氢溶液，室温下孵育10min，以阻断内源性过氧化物酶。
5、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封闭20min（封闭电荷）。
6、去除BSA液，每张切片加入50μl稀释的一抗覆盖组织，4℃过夜。
7、PBS洗3次，每次5min。
8、去除PBS液，每张切片加50μl-100μl相应种属的二抗，4℃孵育50min。
9、PBS洗3次，每次5min。
10、去除PBS液，每张切片加50-100μl新鲜配制DAB溶液，显微镜控制显色。
11、显色完全后，蒸馏水或自来水冲洗，苏木素复染，1%盐酸酒精分化（1s），自来水冲洗，氨水返蓝，流水冲洗。
12、切片经过梯度酒精（70-100%）10min一个梯度，脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。
免疫组化的局限性。灵敏度高、精确性和特异性是一种理想的cancer标记物必须具有的，但至今所发现的cancer标记物还没有能完全满足这些标准。某些正常细胞也分泌一些cancer标记物，因此cancer细胞学并不是单独产生一种标记物，即选用一组抗体比单一抗体更有利。在cancer诊断中评估免疫组化的局限性主要在抗体特异性和解释方面。在免疫组化操作中都必须有适当的阳性与阴性对照，作为技术完整性质量控制，如对照组被忽略或不理想时，免疫组化染色的结果要谨慎对待，免疫组化的正确结果不仅要依靠技术步骤上规范化操作，而且有赖于正确的解释，在报告免疫组化染色结果时不应孤立地解释，应考虑到诊断与鉴别诊断、所应用的抗体特性、所研究组织性质，同时还要注意假阳性与假阴性结果的干扰。免疫组化结果分析是什么？
免疫组化的抗原修复
很多抗原的可视性可以通过抗原修复来提高，抗原修复可以打破福尔马林固定时形成的蛋白质交联，从而使被掩藏的抗原显现出来。抗原修复技术包括不同时间长度的加热或者利用蛋白酶来做酶消化，例如蛋白酶K，胰蛋白酶或胃蛋白酶。加热的方法通常会用到微波炉，高压锅，蒸箱或水浴。将样品在接近100°C高温加热20分钟后再冷却同等的时间。**常用的抗原修复液有a)柠檬酸盐缓冲剂,pH6.0,b)Tris-EDTA,pH9.0和c)EDTA,pH8.0.如需要可用柠檬酸盐缓冲剂做抗原修复：柠檬酸盐缓冲剂配方:10mM柠檬酸钠,0.05%Tween-20,pH6.0或10mM柠檬酸,0.05%Tween-20,pH6.0将含有柠檬酸钠或柠檬酸盐缓冲剂的染色盘放到蒸箱或者水浴中，预热到95-100°C。将切片浸没于染色盘中。盖子虚掩，孵育20-40分钟(研究者需自己决定比较好的孵育时间)。关掉蒸箱或水浴，将染色盘置于室温下，让切片冷却20分钟。在TBS-Tween-20中漂洗切片2次，每次2分钟。开始封闭步骤。 英瀚斯生物免疫组化，高效高质量出结果。吉林小鼠免疫组化价格
英瀚斯生物为您详解免疫组化实验指南！内蒙古病理免疫组化怎么选择
免疫组化实验流程介绍：
英瀚斯生物为您整理总结免疫组化详细步骤：
1、SP三步法
1）石蜡切片，常规脱蜡至水。
2）0.3%或3%H2O2去离子水（无色液体）孵育10-30分钟，以灭活内源性过氧化物酶活性。
3）蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟
4）候选步骤：采用抗原修复：微波（建议30分钟内4次中火）、高压、酶修复方法。自然冷却，再用3分钟×3次.
5）血清封闭：室温15-30分钟，尽可能与二抗来源一致。倾去，勿洗。
6）滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育2~3小时或4℃过夜（比较好复温）。PBS冲洗，3分钟×5次。
7）滴加生物素标记的二抗，室温或37℃孵育30分钟-1h。
8）PBS冲洗，3分钟×5次。
9）滴加SP（链霉亲和素-过氧化物酶），室温或37℃孵育30分钟-1h。
10）PBS冲洗，3分钟×5次。
11）显色剂显色（DAB等）。
12）自来水充分冲洗。
13）可进行复染，脱水，透明。
14）选择适当的封片剂封片。 内蒙古病理免疫组化怎么选择
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