关于免疫组化的封闭：用和二抗来源一致的血清在保湿盒中于37℃孵育15~30min，然后甩去封闭用血清，勿洗；注意：封闭时间根据具体实验调整；封闭液一般选用5%BSA或与二抗来源一致的血清，切记是BSA，不是PBS.很多论坛写的是PBS,太坑了。①使用血清好还是BSA好？答：***是待检样本会非特异性的和蛋白结合，从而导致背景过高，因此可以用BSA或血清封闭掉这部分非特异性的结合，从这点看，BSA和血清没有明显区别。第二是待检样本中可能会有Fc受体，可以和抗体恒定区结合，与抗体特异性无关，封闭血清中有抗体，因此用血清可以封闭掉一抗及二抗和样本Fc受体之间结合。BSA则无法封闭Fc受体。英瀚斯生物为您详解免疫组化实验指南！安徽切片免疫组化检测
免疫组化的局限性。灵敏度高、精确性和特异性是一种理想的cancer标记物必须具有的，但至今所发现的cancer标记物还没有能完全满足这些标准。某些正常细胞也分泌一些cancer标记物，因此cancer细胞学并不是单独产生一种标记物，即选用一组抗体比单一抗体更有利。在cancer诊断中评估免疫组化的局限性主要在抗体特异性和解释方面。在免疫组化操作中都必须有适当的阳性与阴性对照，作为技术完整性质量控制，如对照组被忽略或不理想时，免疫组化染色的结果要谨慎对待，免疫组化的正确结果不仅要依靠技术步骤上规范化操作，而且有赖于正确的解释，在报告免疫组化染色结果时不应孤立地解释，应考虑到诊断与鉴别诊断、所应用的抗体特性、所研究组织性质，同时还要注意假阳性与假阴性结果的干扰。新疆细胞免疫组化免疫组化技术的原理、分类和优点！
免疫组化染色切片的好坏直接影响着病理医生对其染色结果的判断，进而影响病理诊断，所以制作一张良好的免疫组化切片至关重要，它需要病理医生与病理技师两者间的相互协调，密切配合和共同努力，病理医生选择抗体，设置对照，判读结果，指导技术;而技术人员进行实验操作，保证染色质量。在免疫组化切片的制作过程存在多个环节，每一环节的失误都可能影响检测结果，如抗原保存，蛋白酶消化，增强技术及对抗体的管理、使用和试剂的浓度等等，因此制作一张高质量的免疫组织化学切片是多方面相互配合的结果。
免疫组化结果中的假阴性是指所有抗体标记的切片均呈阴性，无阳性信号，假阴性结果不是真实的反应。导致假阴性结果的原因有:(1)抗原修复方法选择不当，根据不同的抗原特点采用不同的修复方法，大多数抗体要求热修复，热修复又包括高压修复、微波修复及煮沸热修复;而对某些细胞内抗原和细胞间质抗原需要用酶消化，如表皮生长因子(EGFR)要求胃蛋白酶(Pepsin)消化，而Vimentin则不用修复;(2)一抗本身的问题:一抗效价降低或失效。在免疫组化中染色结果的假阴性会导致错诊或漏诊，进而影响临床诊断及延误医疗。解决这一问题的可通过设立阳性对照，比较两者染色结果。若阳性对照有表达，表明试剂和染色体系及实验步骤均无问题;若阳性对照无表达，则检测过程中某一试剂或某个步骤存在问题，应逐一查找原因。英瀚斯生物，专业承接免疫组化等各类病理染色检测！
临床应用中，药物靶点免疫组化，英瀚斯生物专业做实验外包服务，一站式医学科研平台。免疫组化及分子病理学方法在疾病诊断中只只起辅助医疗的作用，而药物病理学是用病理学的方法确定药物医疗的靶点、评价药物医疗的疗效、预测药物医疗的反应，因此药物靶点免疫组化属“单独的诊断”。因此对于对照的设置、质量的控制均需要更高的要求，如对试剂的要求，不同于一般的诊断试剂，应按对药物管理的要求操作。HER2蛋白着色3+者可作为临床医生建议患者接受曲妥珠单抗等药物医疗的依据。做免疫组化的目的是什么？四川组织免疫组化检测
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目前几种常用免疫组化方法简单介绍
1）免疫荧光方法是**早建立的免疫组织化学技术。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用较广。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。
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2）免疫酶标方法免疫酶标方法是继免疫荧光后，于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前**常用的技术。本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是：定位准确，对比度好，染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种标记方法，且随着方法的不断改进和创新，其特异性和灵敏度都在不断提高，使用也越来越方便。目前在病理诊断中广为使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法检测系统等。
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