灭活型病毒保存液里含有裂解盐等成分,主要目的是裂解核酸并释放出核酸,从而通过后续的实时荧光RT-PCR进行核酸检测,以判断样本是否含有病毒特征核酸,即是否病毒。
核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两类,是生命的基本物质之一。病毒结构单一,就只含有一种核酸和蛋白质,因此检测出特征核酸就检测出病毒。病毒属于寄生生物,采样后体外无法存活,如果不能及时检测,就需要放入病毒保存液中。为了保护病毒检测环境的安全性,就需要加入裂解盐来灭活病毒,释放出可以被检测的核酸即可。 在Hank's基础之上,添加4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、BSA(牛血清白蛋白第五组分)等病毒稳定成分。广西非灭活型病毒保存液厂商
制造保存管的材质应注意选择,有资料提示聚丙烯(Polypropylene)与核酸的吸附有关,特别是在高张力离子浓度时,聚乙烯塑料(Polyethylene)比聚丙烯(Polypropylene)更容易抓住DNA/RNA。聚乙烯-丙烯聚合物(Polyallomer)塑胶与某些特殊处理的聚丙烯(Polypropylene)塑胶容器更适合做DNA/RNA的储存使用。另外,在使用可折断拭子时,保存管应尽量选择高度大于8厘米的容器,以防止在折断拭子时内容物外溅污染。
生产保存液的水:生产保存液使用的超纯水应经过分子量为13,000的超滤膜过滤,以保证去除生物来源的聚合物杂质,例如RNase、DNase和内,不推荐使用普通纯化水或蒸馏水。 成都一次性使用病毒保存液****通常在数分钟内,病毒的衣壳蛋白就会发生变性,使病毒失去能力。
另一种以核酸提取裂解液为基础配制的保存液,主要成分为平衡盐类、EDTA螯合剂、胍盐(如异硫氰酸胍、盐酸胍等)、阴离子表面活性剂(如十二烷基硫酸钠)、阳离子表面活性剂(如十四烷基三甲基草酸铵)、苯酚、8-羟基喹啉、二硫苏糖醇(DTT)、蛋白酶K等几种或多种组分,这种保存液是直接裂解病毒释放核酸,消除核酸分解酶(RNase),如果用于RT-PCR较为合适,但裂解液可以灭活病毒,这种样本不能用于病毒的培养分离。
病毒保存液使用的金属离子螯合剂推荐使用EDTA盐类(如乙二胺四乙酸二钾、乙二胺四乙酸二钠等),不推荐使用肝素类(如肝素钠、肝素锂),以免影响PCR检测。
生物病毒是一种个体及其微小的生物,甚至比、细菌还要小得多,必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖,是一种非细胞型生物。因此,不论是灭活型还是非灭活型,采样之后,病毒都是只能存活很短时间的。如果没有病毒保存液,病毒在体外几分钟就会大量降解。采样管主要是用于病毒核酸检测的,所以灭活型的保存液虽然使病毒裂解了,但是里面添加的RNA酶抑制剂可以保护其核酸,实验时只要能检测出核酸就可以作出诊断了。
影响病毒保存时间还有一个重要的因素,那就是温度。一般来说,灭活型的保存液由于只需要保护核酸不被降解,在4摄氏度保存一周,-20摄氏度保存一个月,-80摄氏度保存一年。非灭活的保存液在取样后如果不能及时检测,务必要4摄氏度低温保存,保存时间不超过48小时,如果无法及时送往检测点的需要-70摄氏度温度以下保存。 可在较宽的温度范围内维持病毒的活性,降低病毒分解速度,提升病毒分离的阳性率。
目前市面上的一次性使用病毒采样管通常分为两种,一种是非灭活的,能够保护病毒的蛋白和核酸的,另一种是灭活型的,通常含有灭活病毒的裂解盐,裂解蛋白而保护核酸。下面我们一起来聊聊这两种病毒采样管都有什么不一样的地方?
非灭活型病毒采样管保存的病毒完整性更好,检出率会更高,除了核酸检测外还可以用于其他研究。灭活型病毒保存液则使用上更安全,操作环境要求也不用那么严格,各有各的优势。
非灭活病毒采样管可以低温非冻型保存,也不会破坏病毒的外壳,方便长途运输;也适用于各种拭子采样样品,包括口腔拭子、鼻腔拭子、咽拭子等;可以用于H1N1流感病毒和其他任何可以用于拭子采样的病毒,非灭活保存液中的能够有效地防止细菌和,保存液中添加了牛血清白蛋白,能够保护病毒样本,提离率。
可以用来采集咽拭子鼻拭子或者特定部位的组织样本储存的样本可以用于后续的核酸检测或者病毒培养临床实验。陕西一次性使用病毒保存管保存液平均价格
而且能在常温下保存相对较长的时间,节省了病毒样本保存以及运输的成本。广西非灭活型病毒保存液厂商
核酸它是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,存在于所有动植物细胞、微生物体内,生物体内的核酸常与蛋白质结合形成白。根据化学组成不同,核酸可分为核糖核酸(简称RNA)
和脱氧核糖核酸(简称DNA)。同时,由于核酸的性能不稳定,容易变性,所以我们要用适当的方法去保存它,不让它发生降解或变异。而就是属于RNA病毒,要想做好的检测,这就离不开我们下面所说到的产品——病毒保存液。
病毒保存液分为两大类:灭活型和非灭活型病毒保存液。它们的目的都是保护病毒核酸在体外不会迅速降解,便于特定核酸序列扩增达到检测的目的。 广西非灭活型病毒保存液厂商
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