市场上使用的病毒保存液主要有两种,一种是以运送培养基为基础改良的病毒维持液,另一种则为核酸提取裂解液改良的保存液。
前者的主要成分是Eagle's基础培养液(MEM)或Hank's平衡盐,添加了病毒生存所需的盐类、氨基酸、维生素、葡萄糖以及蛋白质,这种保存液使用酚红钠盐做为指示剂,溶液pH值在6.6-8.0时溶液呈粉红色。保存液中添加了必须的葡萄糖、L-谷氨酰胺和蛋白质,蛋白质的提供形式有胎牛血清或牛血清白蛋白,可以稳定病毒的蛋白质外壳。由于保存液营养成分丰富,有利于病毒的成活但是也有利于细菌的生长,如果保存液中污染了细菌,则会大量繁殖,其代谢产物中的二氧化碳会使保存液pH值下降,从粉红色变为黄色。因而大多数厂家都在配方中添加了抑菌剂成分,推荐使用的抑菌剂为青霉素、链霉素、庆大霉素及多粘菌素B等,不推荐使用叠氮钠、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(MCI)和
5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(CMCI)等抑制剂,因为这些组分对PCR反应有影响。由于这种保存液提供的样本基本是活病毒,可以很大程度保持样本的原始性,后续不仅可以用于病毒的核酸提取检测,还能用于病毒的培养和分离。但是用于检测时应该注意的是必须灭活以后再进行核酸提取纯化。
病毒保存液是一种采样管内浸没采样拭子病毒标本的一种保护病毒的被检测物质的液体。背景一次性使用病毒保存管保存液供应商
一次性病毒采样管包括采样拭子和采样管,我们分开来说一下采样拭子的特点和采样管的特点
①采样拭子:我们公司使用的是尼龙植绒拭子(另有人造丝可选)。因为尼龙植绒对微生物、病毒无毒性作用,且不含RNA酶、DNA酶。它能很大程度的增加病毒样本的采集和释放量,确保PCR检测结果的准确性。
植绒拭子杆为ABS材质,独特的可折断设计,折断过程中无微小碎屑产生。方便放入采样管里而不被污染。
②采样管:管身及管盖为聚丙烯材质,高温高压(121°C,15min) 时不变形,低温(-196°C)
不变脆。耐静态挤压与动态撞击。底部锥形设计耐离心与震荡。内装运送培养基(灭活型、保活型),用于样本的释放保存,杜绝渗漏。
采样管内置磁珠,方便洗脱,利于病毒更多释放入样本保存液中。 国内一次性使用病毒保存管保存液生产厂家病毒保存液的质量,是提高PCR检测阳性率与病毒分离阳性率的关键因素,从根本上决定了病毒采样管的质量。
非灭活型的病毒采样管:
除了灭活型的病毒保存液,保存的病毒完整性更好,检出率更高,出了核酸检测外还可以用于其他研究。
灭活型病毒保存液则使用上更安全,操作环境要求也不用那么严格,各有各的优势,目前研究的非灭活病毒保存液的成分主要为Hank’s液基础,在这个基础上,添加了氯化钾,氯化镁和氯化钙等物质为致病菌提供必须的营养离子使之专一性更强、且保存时间更长,更大限度保存致病菌形态的完整性,提高致病菌提取率。
非灭活型的一次性病毒采样管的特点:
①、低温非冻型保存,不破坏病毒的外壳,方便长途运输。
②、适用于各种拭子样品,包括口腔拭子、鼻腔拭子、咽喉拭子等。
③、保存液中添加了氯化钾、氯化镁和氯化钙等物质为致病菌提供了必须的营养离子,使病菌专一性更强、且保存时间更长,可以更大限度保存致病菌形态的完整性,提高致病菌的提取率。
④、保存液中的成分可以有效防止细菌和污染。
采样前,在标签上注明样品信息;
根据不同的实验目的,用采样拭子在相应的部位采样;
采样后迅速将拭子放入含病毒运送培养基采样管中,在折断点处将其折断,旋紧管盖;
使用灭活款采样管新鲜采集的标本,可在常温(5-25°C)条件下,7天内运送至实验室,运输时有冰袋的效果会更好。用于核酸检测的标本,24小时内检测效果更好。
具体采样方法如下:
(1)鼻拭子:将拭子头轻轻插入鼻道内鼻腭处,停留片刻后缓慢转动退出。以另一拭子拭另侧鼻孔,将拭子头浸入采样液中,在折断点处将其折断,弃之。(适合用本产品采样)
(2)咽拭子:用拭子擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,同样将拭子头浸入采样液中,弃之。(适合用本产品采样)。 病毒存在不易保存和易的弊端,但灭活型病毒保存液完美解决了这一弊端。
灭活型病毒保存液主要是核酸提取裂解液改良的病毒裂解型保存液,液体含有高浓度的裂解盐,能够迅速高效地使待测样本里的病毒蛋白裂解失活,可以有效防止,同时又含有Rnase酶抑制剂,能保护病毒核酸不被降解,后续的NT-PCR实验只要能检测出病毒的核酸既可以做出诊断。而且能够在常温下保存相对较长的时间。
病毒的检测不同于常规的生化检测,病毒本身是一种结构简单的微生物,必须 寄生在活细胞内。采样后,病毒离开寄主细胞,在采样管内其蛋白质外壳和核酸都会很快降解,这样核酸检测时就无法判断初始采集的样本是否含有病毒,容易造成假阴性。 病毒保存液,对于很多小伙伴们而言,这个名词是新奇的,殊不知它对于各种病毒的检测具有重要的意义。广州核酸检测病毒保存液****
为了保护病毒检测环境的安全和检测人员的安全,灭活病毒保存液其实是比较好的选择。背景一次性使用病毒保存管保存液供应商
病毒核酸检测过程中,病毒保存液的作用尤其重要,我们的检验工作不可能在采集到样本后就立马进行检测,从采集完样品到开始检测,中间可能遇到各种问题,比如异地运输或邮寄标本,或样品太多无法按时进行检测等等,这时病毒保存液就起到了相当大的作用。病毒保存液分为灭活型和非灭活型,那么我们一般选用哪种比较好呢?
灭活型:病毒和细菌受理化因素作用后失去性,称为灭活(inactivation)。 多数病毒比细菌更容易被灭活。这也使得病毒的长期保存通常比细菌的保存更困难。其实大多数病毒耐冷不耐热,对热不稳定。55—60℃,通常在数分钟内,病毒的衣壳蛋白就会发生变性,使病毒失去能力。这可能是因为此时的病毒已失去了对正常细胞的吸附能力和/或脱衣能力。病毒存在不易保存和易的弊端,但灭活型病毒保存液完美解决了这一弊端。
背景一次性使用病毒保存管保存液供应商
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