免疫组化的DAB显色时间如何把握？
1、DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现浅棕色本底时即可冲洗；
2、DAB显色时间很短（如几秒或几十秒）就出现很深的棕褐色，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间；
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3、此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间；
4、DAB显色时间很长（如超过十几分钟）才出现阳性染色，一方面可能说明你的抗体浓度过低或孵育时间过短（比较好一抗4度过夜）；另一方面就是封闭时间过长。 如何做好免疫组化实验？陕西组织免疫组化要多久
目前几种常用免疫组化方法简单介绍
1）免疫荧光方法是**早建立的免疫组织化学技术。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用较广。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。
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2）免疫酶标方法免疫酶标方法是继免疫荧光后，于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前**常用的技术。本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是：定位准确，对比度好，染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种标记方法，且随着方法的不断改进和创新，其特异性和灵敏度都在不断提高，使用也越来越方便。目前在病理诊断中广为使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法检测系统等。
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免疫组化实验注意事项总结：
Ø本实验室所用切片一般是石蜡切片。
Ø烘片：使蜡片水分蒸发，石蜡软化，组织切片牢固贴在玻片上；烘片至跟烘片前透明度有差异。
Ø抗原修复时，使片子始终浸没在修复液中，液体不能干。
Ø一抗孵育在37度培养箱，湿盒放置1h，省时间和结合效果好，不要超过1h，容易过染。
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Ø二抗使用：两个二抗放大信号或一个二抗；若抗体信号强，可不用放大信号，尽量增大信噪比。
Ø10XDAB在常温溶解，尽可能现用现配，放于4度储存时间久了效果不佳。
Ø复水和脱水时所用的梯度酒精不可混用，要区分开。
Ø加抗体和显色液时，都要将片子甩干，在半干半湿的状态下再加，不然容易造成溶液的二次稀释。
Ø整个操作过程中在显色之前，一定不能干片。
免疫组化的基本原理
免疫组化（Immunohistochemistry, IHC）是一种利用抗原-抗体特异性结合的原理，通过显色反应在组织切片上定位特定蛋白质的技术。该技术结合了免疫学和组织学的优点，能够在细胞或亚细胞水平上精确显示目标蛋白的分布和表达情况。免疫组化的基本原理是利用一抗与目标蛋白结合，再通过二抗与一抗结合，通过显色系统（如DAB）使目标蛋白可视化。这种方法不仅能够提供蛋白质的定位信息，还能通过半定量分析评估蛋白质的表达水平。 常见的免疫组化方法有哪些？
免疫组化的特点：
1）特异性强。免疫学的基本原理决定抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时，才会出现交叉反应。
2）敏感性高。在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍；现在由于ABC法或SP三步法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。
3）定位准确、形态与功能相结合。该技术通过抗原抗体反应及呈色反应，可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对病理学领域开展深入研究是十分有意义的。
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做免疫组化的目的是什么？陕西组织免疫组化要多久
确定来源不明的转移瘤的原发部位，临床上免疫组化也可以进行操作。对于来源不明的转移瘤，用免疫组化技术有助于确定恶性cancer的组织学来源，进一步确定原发部位。如角蛋白抗体(CK20)在胃肠道cancer、胆管cancer、胰腺cancer中阳性，而在肺cancer、乳腺cancer、肾cancer中阴性;Tg阳性可考虑甲状腺转移;波形蛋白(Vimentin)阳性支持肉瘤的诊断;前列腺特异性抗原(PSA)阳性可考虑前列腺转移;甲状腺球蛋白阳性可考虑甲状腺滤泡细胞cancer;肌动蛋白(Actin)、肌球蛋白(Myosin)、结蛋白(Desmin)、肌红蛋白(Myoglobin)阳性可考虑横纹肌肉瘤;S-100蛋白阳性支持黑色素瘤的诊断;等等这些都为cancer的医疗及预后提供了依据。陕西组织免疫组化要多久
