HE染色细胞质过染分析及应对原因:(1)伊红染色液浓度太高,特别是焰红燃料、四溴四氯荧光素钠的存在;(2)切片在伊红染色时间过长;(3)切片在伊红染色后经乙醇脱水步骤时过的太快,而使乙醇分化伊红的作用不能产生。对策:适当稀释伊红染色液,减少伊红染色时间,或者使切片在乙醇脱水等步骤时,停留时间相对均匀。同样,也要检查切片的厚度是否合适。切片中出现蓝黑色沉淀物分析及应对原因:苏木精染色液中的金属膜,黏附在玻片上。对策:每天染色前仔细过滤苏木精染色液,或建议使用半氧化苏木精染色液,如Gill苏木精染色液,可以避免过多的金属膜产生。科研常备实验操作之HE染色。湖北靠谱的HE染色检测
HE染色原理:一、细胞核染色原理:苏木精为碱性天然染料,可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA,在DNA的双螺旋结构中,两条核苷酸链上的磷酸基向外。使DNA双螺旋的外侧带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精碱性燃料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。二、细胞浆染色原理:细胞浆内主要成分是蛋白质,为两性化合物、细胞浆的染色与pH值有密切关系,当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时,胞浆对外不显电性,此时酸或碱性染料不易染色。当pH调到6.7-6.8时,大于蛋白质的等电点pH值,表现酸性电离,而带负电荷的阴离子,可被带正电荷的染料染色,现时胞核也被染色,核和胞浆难以区分。因此必须把pH调至胞浆等电点以下,在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷(阳离子),就可被带负电荷(阴离子)的染料染色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料,在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷(阳离子)结合而使细胞浆染色,细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织,嗜伊红颗料等被***成不同程度的红色或粉红色,与蓝色的细胞核形成鲜明的对比西藏专业的HE染色哪家好HE染色的基本原理和结果分析。
HE染色观察细胞凋亡,凋亡检测中形态学方法是**直观、可靠的方法之一。对组织和各种细胞进行染色后,在光学显微镜、荧光显微镜或电子显微镜下观察,通过观察细胞的形态或染色的类型来判断凋亡的发生与否。细胞涂片或细胞甩片的制备:对于贴壁细胞,可将盖玻片放于培养器皿中,让培养细胞长于玻片上,然后用药物诱导细胞凋亡后取出,用4%多聚甲醛固定5min。对于悬浮细胞,用药物诱导细胞凋亡后,离心1000r/min收集细胞,用PBS洗2次,收集调整细胞数为1X105/ml,涂片或用离心甩片,用4%多聚甲醛固定5min;在光学显微镜下,贴壁细胞由原来的梭形或多角形变小、变圆,核呈蓝色或蓝黑色,胞浆呈淡红色,核固缩、破碎,形成凋亡小体等。悬浮细胞,整个细胞皱缩,核固缩,破碎,形成凋亡小体,染色质颜色加深等。
HE染色是苏木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,简称HE染色法 ,石蜡切片技术里常用的染色法之一 。苏木精染液为碱性 ,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色 ;伊红为酸性染料 ,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中**基本、使用*****的技术方法。由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。经苏木精染色后,细胞核及钙盐粘液等呈蓝色,可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝,如处理适宜,可使细胞核着清楚的深蓝色,胞浆等其它成分脱色。再利用胞浆染料伊红染胞浆,使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。HE染色结果如果使用计算机分析软件分析?
HE染色常见问题:成片的染色模糊不清,灰染答:(1)组织未及时固定,部分自溶;或固定不佳,深部组织未处理到。这种只能重新固定了。(2)尽管乙醇也是一种固定液,但尽量少用或不用,因为其会导致组织发硬变脆,染色效果不好。(3)包埋时蜡的温度过高,或切片后烤片时间和温度过久过高都不好,可能会导致无法染色。(4)脱蜡不彻底;染料有问题;分化过度导致的颜色变淡,镜下组织界限不清;染完后的脱水和透明不佳,水雾残留在组织上。(5)通风窗中(防止空气中的水雾),戴口罩操作封片(减少哈气带来的水雾)。HE染色,即是苏木精-伊红染色法,是形态学比较常用的染色方法。海南比较好的HE染色价格
HE染色取材和样本保存方式。湖北靠谱的HE染色检测
HE染色全名为苏木精和伊红染色方法,是**基本的病理学染色技术。由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。经苏木精染色后,细胞核及钙盐粘液等呈蓝色,可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝,如处理适宜,可使细胞核着清楚的深蓝色,胞浆等其它成分脱色。再利用胞浆染料伊红染胞浆,使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。质量好的HE具备条件1.细胞核与细胞浆蓝红相映,鲜艳亮丽;2.胞核鲜明、核膜、核染色质颗粒均清晰可见;3.组织或一般结构特点及假物质成分均能显示出来。湖北靠谱的HE染色检测