免疫组化实验所用的组织和细胞标本是什么样的?
实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理大片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本**常用、**基本的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可进行抗原修复,是免疫组化中优先的组织标本制作方法。
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在临床应用中,免疫组化还可以进一步分类不同qi官与组织交界处cancer。由于重叠的特征,在一些组织qi官交界处的cancer,只凭组织学基础对cancer进行分类很困难。如胃肠道梭形细胞肉瘤是肌肉起源的平滑肌肉瘤,是间质起源的胃肠道间质瘤(GIST),还是神经起源的神经鞘瘤;同样发生于组织交界处的cancer有睾丸胚胎cancer与精原细胞cancer,两者较难区别,且医疗与预后明显的不同,但用免疫组化检测角蛋白就较易于区别:角蛋白阴性则为精原细胞cancer,而角蛋白阳性则为胚胎cancer。河北免疫组化怎么样病理报告中的免疫组化到底有什么作用?
病理医师日常工作中经常说的一句话应该就是“做个免疫组化吧”;不管是临床医师,还是患者,他们问的多的问题则是“为什么要做免疫组化?”病理医师通过“特殊染色”来进行细胞的识别。这一做法的依据是特定细胞和组织中的成分不同、则化学性质不同,通过染色的方法则可以呈现不同颜色。不过,由于组织固定或储存等,会造成相应物质的活性降低甚至消失,因而限制了特殊染色方法的应用。随着免疫学研究的进展,根据抗原与相应抗体间特异性结合的性质,则有了现在免疫组化的方法:不同细胞、不同组织中抗原有一定差异,抗体与被测组织中的特定抗原结合,进而通过一定显色方法将结合的抗体显示出来。如有相应显色,则证实可能有被测抗原;无显色则可能无被测抗原。当然,这一方法中需注意相应的“例外”,如抗体的非特异性结合、非特异性显色,则容易造成“假阳性”;或者虽有相关抗原、但所用抗体与该抗原并未结合等,则容易造成“假阴性”。随着免疫组化的应用经验的增加,这些问题在常规应用中尽量得以避免,前者如各种显色方法的优化;后者如抗原修复方法的优化、新型抗体开发及选择。
免疫组化中IHC vs ICC的区别。英瀚斯生物为您说明。除了生物学来源,IHC和ICC在样品处理的程度上也有所不同。ICC需要透化,要么通过固定过程,要么是单独的透化步骤,这样抗体才能与细胞内的靶点相结合。而IHC可能不要单独的透化步骤,这取决于切片的厚度和固定方法。包埋在石蜡中的IHC切片必须进一步处理,才能进行抗体染色。一旦处理好样品,IHC和ICC的染色操作就几乎没什么差异了。当然,就染色而言,根据所使用的抗体来优化还是少不了的。动物、细胞的免疫组化、免疫荧光,就找英瀚斯生物!
英瀚斯生物为您整理免疫组化实验步骤
1、石蜡切片置于65℃烘箱中烘片2h,脱蜡至水,用PBS冲洗三次,每次5min。
2、切片置于EDTA缓冲液中微波修复,中火至沸后断电,间隔10min低火至沸。
3、自然冷却后PBS洗3次,每次5min。4、切片放入3%过氧化氢溶液,室温下孵育10min,以阻断内源性过氧化物酶。
5、PBS洗3次,每次5min,甩干后5%BSA封闭20min(封闭电荷)。
6、去除BSA液,每张切片加入50μl稀释的一抗覆盖组织,4℃过夜。
7、PBS洗3次,每次5min。
8、去除PBS液,每张切片加50μl-100μl相应种属的二抗,4℃孵育50min。
9、PBS洗3次,每次5min。
10、去除PBS液,每张切片加50-100μl新鲜配制DAB溶液,显微镜控制显色。
11、显色完全后,蒸馏水或自来水冲洗,苏木素复染,1%盐酸酒精分化(1s),自来水冲洗,氨水返蓝,流水冲洗。
12、切片经过梯度酒精(70-100%)10min一个梯度,脱水干燥,二甲苯透明,中性树胶封固。 做好免疫组化,你需要了解这些!陕西动物组织免疫组化要多久
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免疫组化染色呈阴性结果的原因有哪些?
1、抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误。不是抗体浓度越高就越易出现阳性结果,抗原抗体反应有前带和后带效应,必须摸索比较好浓度。
2、抗原修复不全,对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位,以利于与抗体结合;建议微波修复用高火4次*6min试试。有人做过实验,这是比较好的时间和次数。若不行,还可高压修复。
3、组织切片本身这种抗原含量低。
4、血清封闭时间过长。
5、DAB孵育时间过短。
6、细胞通透不全,抗体未能充分进入胞内参与反应。
7、开始做免疫组化,建议一定要首先做个阳性对照片,排除抗体等问题。 甘肃动物组织免疫组化注意事项