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使用研磨仪、研磨棒或者使用超声破碎细胞的方法破碎细胞,加入去污剂,如sds等,除去膜脂。去除细胞内的蛋白质,包括与DNA结合的组蛋白,通过加入蛋白酶,醋酸盐沉淀,或者酚/氯仿抽提等方法去除。加入RNA酶去除RNA,如实验不严密,可省略此步。沉淀DNA,需在冷乙醇或异丙醇中沉淀,放在冰箱-20℃沉淀30分钟以上,原理是DNA在醇中不可溶而黏在一起发生沉淀。总结:DNA提取方法有下面⑦种一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb二.甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。三.玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。四.异丙醇沉淀法:基本同1法,*用二倍容积异丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)五.表面活性剂快速制备法:用TritonX-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。六.加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。七.碱变性快速制备:先用NaOH作用20分钟,再加HCI中和。浙江植绒拭子源头直供植绒拭子是通过静电场将尼龙纤维按照一定方向依次顺序沉积在塑料杆的表面,形成刷形层的。

***采样管采集及短期运送外环境禽流感***的,?所需装液量一般为5ml或者6ml。【***采样管?主要组成成份】Hank’s液基础、庆大霉素、******、BSA(V)、冷冻保护剂、生物缓冲剂和氨基酸。在Hank’s基础之上,添加BSA(牛血清白蛋白第五组分)、HEPES等***稳定成分,可在较宽的温度范围内维持***的活性,降低***分解速度,提升***分离的阳性率。【***采样管??使用方法】?1.采样前,在采样管的标签上标注相关样品信息。2.根据不同的采样要求,用采样拭子在相应的部位采样。3.迅速将拭子放入无菌采样管中。4.将采样拭子高出采样管的部分折断,旋紧管盖。5.新鲜采集的临床标本应在4℃下48小时内运送至实验室,未能48小时送至实验室的,应置于-70℃或以下保存。标本送至实验室后应尽快接种分离,48小时内能接种分离的可置于4℃保存。如未能接种的应置于-70℃或以下保存。6.具体采样方法有以下几种:a)鼻拭子:将拭子头轻轻插入鼻道内鼻腭处,停留片刻后缓慢转动退出。以另一拭子拭另侧鼻孔,将拭子头浸入采样液中,尾部弃去。(适合用本产品采样)b)咽拭子:用拭子擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,同样将拭子头浸入采样液中,尾部弃去。。
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