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免疫组化基本参数
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免疫组化企业商机

免疫组化的特点:

1)特异性强。免疫学的基本原理决定抗原与抗体之间的结合具有高度特异性,因此,免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示,如角蛋白(keratin)显示上皮成分,LCA显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时,才会出现交叉反应。

2)敏感性高。在应用免疫组化的起始阶段,由于技术上的限制,只有直接法、间接法等敏感性不高的技术,那时的抗体只能稀释几倍、几十倍;现在由于ABC法或SP三步法的出现,使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合,这样高敏感性的抗体抗原反应,使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。

3)定位准确、形态与功能相结合。该技术通过抗原抗体反应及呈色反应,可在组织和细胞中进行抗原的准确定位,因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察,这样就可以进行形态与功能相结合的研究,对病理学领域开展深入研究是十分有意义的。

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免疫组化在在病理诊断中,随着各种抗体新的用途不断被发现及越来越多的新型抗体的出现,免疫组化在cancer诊断及鉴别诊断、分类、预后判断等方面产生了重大的影响。由于免疫组化技术也存在一些局限性,因此,深入研究免疫组化原理和技术,并努力实现规范化的操作,才能充分发挥免疫组化在病理的诊断及鉴别诊断、判断预后、指导临床医疗中的作用。

观察组织切片中抗原的数量及其在组织中的分布情况,对抗原进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学,由于抗原与抗体特异性结合,因此通过免疫组化使标记抗体的显色剂(酶、荧光素、同位素、金属离子等等)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)。IHC所用标本主要为两大类:组织标本和细胞标本,其中制作组织标本更常用、更基本的方法是石蜡切片。石蜡切片对于组织形态保存好,有利于各种染色对照观察,而且能长期保存;石蜡切片中使用的甲醛固定剂对组织内抗原暴露有一定的影响,但可进行抗原修复,是免疫组化中优先选择的组织标本制作方法。 浙江组织免疫组化外包做免疫组化需要多少钱?

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免疫组化的局限性,可能会有假阳性。阳性信号定位不正确即为假阳性,包括着色不匀、背景着色、边缘效应,另外组织的某些特定成分也能导致假阳性结果。假阳性可能的原因有:(1)一抗浓度及一抗是否失效,抗体有一个合适的浓度范围且必须在有效期内使用,过期的抗体或者不着色,或者背景着色,形成假阳性;(2)试剂未充分覆盖组织,组织边缘的试剂易干浓度较组织中间高致深染;(3)抗体孵育时间过长,由于室温的影响夏季孵育时间稍短,冬季孵育时间稍长;(4)操作过程中组织变干,造成组织边缘收缩或损坏形成伪影,产生假阳性;(5)3,3'-二氨基联苯胺(DAB)显色时间太长,DAB宜现配现用,配制时间比较好在30min以内;(6)由于胞浆里含有较多的蛋白质,因此间质和胞浆中出现很多非特异性的染色,如内源性酶血红蛋白、肌红蛋白等造成的着色,可以通过血清封闭解决;乳腺cancer组织中的脂肪细胞、淋巴细胞也会产生非特异性的染色;(7)非特异性抗体吸附常见于坏死组织中,使坏死组织呈较高的背景染色,在免疫组化中应避免选择坏死组织较多的蜡块。

目前几种常用免疫组化方法简单介绍

1)免疫荧光方法是**早建立的免疫组织化学技术。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便,所以在临床病理诊断、检验中应用较广。它利用抗原抗体特异性结合的原理,先将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光,从而可确定组织中某种抗原的定位,进而还可进行定量分析。

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2)免疫酶标方法免疫酶标方法是继免疫荧光后,于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前**常用的技术。本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是:定位准确,对比度好,染色标本可长期保存,适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速,已经衍生出了多种标记方法,且随着方法的不断改进和创新,其特异性和灵敏度都在不断提高,使用也越来越方便。目前在病理诊断中广为使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法检测系统等。


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确定cancer分期,免疫组化技术应用于临床可以进行处理哦,英瀚斯生物为您处理。cancer分期是判断预后的一个指标,与是否浸润、有无淋巴管或血管侵袭密切相关,而通过免疫组化方法可以判断cancer是否浸润、有无淋巴管或血管侵袭。层黏连蛋白和Ⅳ型胶原的单克隆抗体可以清楚的显示基膜的主要成分,用于区分原位*和浸润*,一旦上皮性*突破基膜为浸润,未突破基膜为原位;显示血管和淋巴管内皮细胞的标记物第八因子相关蛋白、D2-40等则可清楚显示cancer对血管或淋巴管的浸润。因此对许多cancer的良恶性鉴别及有无血管或淋巴管浸润,免疫组化结果作为主要的鉴别依据。免疫组化流程是什么样的?陕西组织免疫组化是什么

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做免疫组化时如何选择一抗?

1、单克隆和多克隆抗体的选择。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合,就像导弹精确地命中目标一样。另一方面,即使是同一个抗原决定簇,在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体,形成好几种单克隆抗体混杂物,称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中,一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高,但易出现非特异性染色(可以通过封闭等避免)。

2、应用范围的选择。有的一抗只能用于Westernblotting,或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等;甚至标明石蜡切片或冰冻切片。

3、种属反应性的选择(speciesreactivity)。这一点很重要,表明这种抗体可能存在种属差别,且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。

4、种属来源,一般兔来源的多是多克隆抗体;而小鼠来源的多是单克隆抗体,但也有另外。根据此来源来选择相应的二抗。

5、生产厂家的选择。


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