本发明涉及生物医药领域，涉及一种常温下长时间口腔拭子DNA保存和提取方法。背景技术：近年来，采用口腔拭子进行DNA检验有逐渐增多的趋势，由于国内没有专门用于采集口腔脱落细胞的工具，而只是使用普通的医用棉签，而不同的人采集口腔脱落细胞在擦拭次数、力度、检材剪取量及扩增用的模板量上都存在一定差异，导致了口腔拭子的DNA常温下保存效果不大稳定，影响了口腔拭子在DNA常温下保存中的应用。
为规范口腔拭子DNA的采集，提高口腔拭子的DNA保存效率，亟需一种常温下长时间口腔拭子DNA保存和提取方法。
这款口腔拭子目前非常多的用于疾病筛查，基因检测，分子诊断，HIV采集细胞，BINGDU 微生物等采集。广西尼龙口腔拭子供应商
下面将结合实施例对本发明作进一步说明。实施例1一种可用于荧光PCR扩增的快速提取全血基因组的方法中的荧光PCR扩增反应液包括浓度或含量和组分如表1。将所述的荧光PCR扩增反应液对血液样本中的管家基因***DH进行荧光PCR扩增，方法如下：将**管颠倒混匀后，吸取100μL血液至，加入200μL的核酸释放剂，涡旋混匀，然后5000g离心30s，弃上清，获得细胞沉淀；然后再加入200μL核酸释放剂，涡旋1min至沉淀完全散开，5000g离心30s，弃上清；向细胞沉淀中加入50μL核酸释放剂，涡旋振荡1min，室温放置5min，12000g离心30s，取上清液即为提取的血液基因组DNA；取上清液3μL，加入到配制好的荧光PCR反应液，于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。所述的荧光PCR扩增程序如下。步骤①：50℃，2min，循环1次。步骤②：95℃，5min，循环1次。步骤③：95℃15s，55℃30s（收集荧光），循环40次。结果分析：平行扩增的荧光定量PCR反应中，阴性对照无扩增，说明反应体系正常，无污染。用本发明处理了10份来源不同的人血液样本，然后用人管家基因***DH引物进行荧光PCR扩增检测，结果如图1所示。 贵州泡沫口腔拭子口腔拭子适用于采集任何年龄段人群的DNA样本。
加入20μteinaseK溶液，混匀。加入200μL缓冲液GB，充分颠倒混匀，在56℃放置14min（期间颠倒混合样品数次），溶液应变清亮，若未完全变清亮，延长裂解时间至完全变清亮。加人200μL无水乙醇，充分振荡混匀10s，此时可能会出现絮状沉淀。将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。向吸附柱中加入500μLGD（已加入无水乙醇），12,000rpm离心30s，弃废液，将吸附柱CB3放回收集管中。向吸附柱中加入600μLPW（已加入无水乙醇），12,000rpm离心30s，弃废液，将吸附柱CB3放回收集管中。12,000rpm（~13，400×g）离心2min。将吸附柱放置新的，以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。向吸附柱中悬空滴加50～200μL洗脱缓冲液，室温放置2～5分钟，12,000rpm（~13，400×g）离心2min，将溶液收集到离心管中，测定浓度及纯度后，取3μL，加入到配制好的荧光PCR反应液，于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。用本发明和对照产品对8份样本同时进行荧光PCR扩增。结果如图6，本发明所有反应孔背景信号好、Ct值都在21～25之间，荧光扩增曲线呈典型的S型。
公司介绍深圳市华晨阳科技有限公司为中国香港晨阳国际集团旗下企业,本工厂专业生产经营：医疗器械（TOC取样拭子、***采样试子、DNA采样拭子、宫颈采样试子、咽喉采样试子、鼻腔采样拭子、妇女***采样刷、细胞保存液、细胞培养基、液基保存液、皮肤外用涂药器、微生物取样捧、阴道冲洗器.）工业净化产品：（无尘布、擦拭布/纸、净化棉签等）；电子产品。通过ISO9001，ISO14001，ISO13485，CE，CFDA认证产品应用于：微生物，制药，医疗器材，食品，微电子，光学，光电，磁盘，硬盘，半导体，晶圆，机电，实验室，研究所，汽车造船工业，航空航天领域等各个行业，覆盖范围广， 这款口腔拭子拥有新颖的折点设计，让拭子轻松折断并进入管中，更加便于操作。
DNA口腔采样棉签/采样咽拭子棉花头棉签产品：100％质量棉花制成，质感柔滑，经高温处理，清洁卫生，棉花与棉棒紧密结合，棉头不起毛，使用起来更安心，放心且携带方便，放在包包完全不占空间随时随地都可以使用无论何时都以让人保持清爽，舒适的感觉且袋装产品，质美价低，经济超值．一次性采样植绒拭子产品：已通过国家质量监督医疗器械检测中心进行全项目检测，并出具检ZC1011965/96/97合格报告。采样拭子分为咽拭子、口腔拭子、H7N9禽流感***采集拭子，微生物擦拭取样拭子，DNA拭子、宫颈拭子，能供各种实验室检测中心和医院使用。采样植绒拭子比传统缠绕拭子采集样本和释放样本的量高3倍，而且对细胞样本不造成损害，好好的保证细胞样本的存活率，不残留脂肪酸，对试验检测效果不造成影响，更不会对人体造成伤害。CY-96000型鼻腔采样拭子供医疗机构采集患者鼻腔内***的***及DNA样本；CY-93050型口腔采样拭子供医疗机构采集患者口腔内及咽喉***的***及DNA样本；CY-95000型宫颈采样拭子供医疗机构采集妇女阴道内及宫颈***的***样本，适用妇女患者，用来采集子宫颈上皮脱落细胞，用于人**瘤***（HPV）核酸。这款口腔拭子主要用于提取采集人体口腔黏膜DNA用的，采集和释放都比较好。广西尼龙口腔拭子供应商
口腔拭子是由手柄、连接杆和采样头组成。广西尼龙口腔拭子供应商
所有反应孔背景信号好、Ct值都在19～25之间，荧光扩增曲线呈典型的S型，说明本发明实例1提供的血液样本快速提取法用于荧光PCR扩增的方法具有较好的可行性。将四份不同来源不同的人血液样本进行荧光PCR扩增检测，每份样本平行三次，结果分别如图2、图3、图4、图5所示，由图可见，每个样本的平行实验，其曲线的Ct值很接近且≤25。说明本发明实例提供的血液样本快速提取法用于荧光PCR扩增的方法有可靠的重复性以及较好的均一性。实施例2与市场现有的血液基因组提取试剂盒产品对比。本发明的具体步骤如下：将**管颠倒混匀后，吸取100μL血液至，加入200μL的核酸释放剂（20mM～80mM的氢氧化钠溶液、～、～、～、～***钠、～3%甲酰胺），涡旋混匀，然后5000g离心30s，弃上清，获得细胞沉淀；然后再加入200μL核酸释放剂，涡旋1min至沉淀完全散开，5000g离心30s，弃上清；向细胞沉淀中加入50μL核酸释放剂，涡旋振荡1min，室温放置5min，12000g离心30s，取上清液即为提取的血液基因组DNA；取上清液3μL，加入到配制好的荧光PCR反应液，于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。选用某公司的血液基因组提取试剂盒作为方法比对，具体操作过程：将取血管颠倒混匀数次，吸取200μL血液于。广西尼龙口腔拭子供应商
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