一提起蛋白质浓缩、更换缓冲液,我们都会想起超滤。这是一种我们都很熟悉的膜分离技术。它可用来分离溶液中极小的颗粒和溶解的分子。这种方法的较大特点是操作简便,只需要浓缩离心管和离心机,即可圆满完成我们的任务。与层析、透析等方法相比,超滤对被处理的分子更加温和。它不需要有机萃取,就不会导致蛋白变性。这种方法非常高效,可同时浓缩和纯化分子。操作可在低温(比如冷库)下进行。另外,快速、便宜,也是许多人青睐它的原因。浓缩离心管的操作很简单。选择适当的浓缩离心管,加入待处理的样本,按照离心管的指示进行离心操作,之后回收截留的样本。在离心力的作用下,溶液中的小分子溶质和溶剂透过超滤膜,被收集在滤过液收集瓶中,而大分子溶质被超滤膜截留在浓缩离心管中。这种分离的主要依据是分子大小,但分子形状和电荷等其他因素也会有影响。超滤离心管可根据不同孔径大小选择超滤膜,以便过滤出所需大小范围内的目标分子。河南外泌体超滤离心管供应商
超滤离心管从细胞培养上清液中浓缩蛋白,在园子里找到一些关于浓缩蛋白的一些帖子,但还有些问题还是向园子里的大虾请教一下。我们定的是 15ml规格的管子,不知道有没有谁以前做过的,有关于转速,时间给一些建议,另外细胞上清液离心前是否需要什么预处理?离心之后回收蛋白时怎么尽量减少损失?如果要把管子重复利用,NaoH清洗后,如何在20%的乙醇中保存?是将其浸到乙醇中防于4度,还是在管子中灌入乙醇?我用过5ml的管子,当时使用的转速是4000rpm 8min,可以把5ml的样品液浓缩到约200ul,这只供参考,具体情况还要由您的样品决定。我保存5ml管子的方法是把内管取出,浸泡于装有20%乙醇的烧杯中。四度保存。四川10K超滤离心管公司超滤离心管能够去除混合物中的杂质和低分子量化合物,得到高纯度的目标化合物。
我用的是3500g,4度离心,时间可以自己控制,取决于你之后的浓缩体积,我一般是200ul左右。千万别一下离心时间太长,不同的蛋白浓缩的速度不同,有的需要长时间离心,有的则一下子就好。当然也和你的蛋白是否比较纯,所用的是什么buffer,还有蛋白的浓度有关系。所以离心时要先短些时间观察一下你的浓缩速度,不要一下子浓缩过了,甚至形成沉淀就得不偿失了。另外其实他们的管子都设计的是一次性使用,所以如果想重复使用,不要离得速度太高,4000-4500RPM就差不多了,另外重复使用时要看看管壁上有没有裂纹,现在的管子好像不如从前的结实了。
一种超滤离心管,包括主管,主管为顶部开口底部封闭结构,主管开口处安装有顶盖,主管内安装有内管,内管上下贯通,内管底面贴合有超滤膜,超滤膜将内管底面包覆,超滤膜底面贴合有支撑板,超滤膜位于内管底面与支撑板之间,内管底部安装有底托,内管配合底托将超滤膜、支撑板压紧,内管、超滤膜、支撑板、底托与主管中位于底托以下的容腔空间连通。本实用新型中,有效将样本溶液和滤液经离心和超滤分离,分离纯度高。本产品由于超滤膜垂直与管体,超滤膜的另一侧为支撑网,支撑网设有大量网孔,支撑网的另一侧直接为出液口,大口径的出液口极大效率的增加滤液通量,并且拆卸方便,超滤膜易于更换,其他部件易于清洗,可重复使用,经济环保。济环保。济环保。超滤离心管可以应用于许多领域,如生物技术、药学、食品科学等。
蛋白质浓缩和替代缓冲液常用的超滤管,微孔(mwco10kd)常用的micon-ultra-15超滤管。根据靶蛋白的分子量、浓缩前的体积和浓缩的靶体积,还可提供不同尺寸和尺寸的其他类型的mwco超滤管。它可以重复使用。1。选择合适的超滤管主要考虑分子量和浓度。通常靶蛋白的分子量不应大于靶蛋白分子量的1/3。例如,当靶蛋白的分子量为35kDa时,可以选择靶蛋白分子量为10kDa的超滤管。如果靶蛋白的分子量约为10kd,则可使用分子量为3kd的超滤管。2。新购买的超滤是干燥的。使用前加入Milliq水。水的体积完全覆盖在膜上,冰浴或冰箱被预先冷却几分钟。倒出水后,可以加入蛋白质溶液。蛋白质添加量不超过管顶白线。超滤管在加入蛋白质溶液前需要在冰上预先冷却。三。平衡。使用超滤离心管时应注意遵循正确的操作程序和安全规定,以避免意外伤害或污染。四川10K超滤离心管公司
超滤离心管可用于分离细胞培养上清中的蛋白质和小分子物质。河南外泌体超滤离心管供应商
质量和重心都应该平衡。注意速度和加速度不要太快,否则会直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心预冷至4度〉。膜和旋转轴的方向根据说明进行调整(对于角向离心机,膜垂直于轴〉。在实际应用中,一般的速度开度比手动低,可以延长离心管的使用寿命。4。当浓缩到剩余的1毫升时,取中国产的504.1l布拉德福德溶液,加104 l流过,看是否变蓝,以判断ur管是否漏蛋白。如果管道泄漏,重新倒入上层,然后流过新管道开始超滤。为了准确确定管道是否泄漏,用5 mg/ml BSA离心10分钟,然后将其穿过,大致运行胶水或Bradf ord,继续添加剩余的蛋白质溶液以浓缩(在冰上操作以防止蛋白质加热〉,直到所有浓缩物都添加完毕。离心过程中应注意是否有蛋白质沉淀,导致堵塞。如果发生沉淀,有必要确定沉淀的具体原因是蛋白质浓度过高还是缓冲液不当。河南外泌体超滤离心管供应商