离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的缓冲溶液,直到蛋白不发生沉淀为止。用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再浓缩至1ml左右,连续三次,之后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。超滤离心管的选择需要根据被过滤溶液或混合物的性质和所需的纯度和体积来确定。深圳蛋白分离离心管厂家
超滤离心管应用:1、组成部分:该装置包括一个盖子、一个过滤器和一个50ML的离心管。2、带有摆桶式或定角式转子的离心器以及可以容纳50mL试管的样本腔/试管座。①注意:为了避免在离心过程中损坏装置,在旋转前请检查间隙。 3、带有200微升(μL)的移液管,用于浓缩液回收适用性。①注意:该产品未经消毒,只供一次使用,保质期3年。为确保对预定用途的适用性,建议进行初步的回收和截留试验。4、浓缩含有抗原、抗体、酶、核酸(单株或双株DNA/RNA样本)、微生物、洗出液和净化样本的生物样本。5、净化组织培养基提取液和细胞溶解液中的大分子成分,从反应混合液中去除引物、连接或分子标记,在HPLC之前去除蛋白质。深圳蛋白分离离心管厂家超滤离心管利用离心力和超滤膜将分子分离和过滤出来。
选择合适的超滤管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。新买来的超滤是干燥的,使用前加入超纯水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。不同离心机的转速rpm换算成g之后,有所不同。
我们面对上面客户反映的问题使用2次以上出现问题是很正常的,但是我们也不能保证客户使用5次,8次,还是更多次就一定会出现穿孔不能用,我们必须再一次强调提醒做实验的各位老师,这个超滤管必须严格按照说明书规定,一次性使用,不要重复使用,重复使用虽然有的人可以用几次,但是过滤效果已经严重影响了,效果肯定一次次的下降!你说这样过滤的样品做后续实验,那你的后续实验还可信吗?所以厂家也一再强调较好不要重复使用!另外,有的客户说自己的超滤管使用一次就碎了,这是什么原因呢?超滤管的质量问题还是离心机转速的问题呢?说到这里,我们也再一次提醒大家超滤管使用如果转速太高,离心力肯定会更大!这样不断用力磨损,很容易一次就碎了,也可能使用几次碎了!超滤离心管可以通过手动或自动方式进行操作,以适应不同的实验室流程要求。
超滤离心管,备有四种材质的超滤膜:聚醚砜、三醋酸纤维素、再生纤维素和Hydrosart,可根据不同要求灵活选用;两种回收浓缩液的方法:既可用吸管直接吸取并回收,又可将离心管放入离心机反甩,将浓缩液甩入回收帽中,加盖保存。这两种方法都可使浓缩液达到近乎完全回收;截留分子量普遍,配有3K、5K、10k、30K、50K、100K、300K、1000K、0.2μl的聚醚砜膜;较新推出ZL产品Hydrosart膜2K型,具有极低的蛋白吸附特性,高流速、高通量,是免疫球蛋白浓缩和脱盐的理想用膜。超滤离心管通常由聚碳酸酯或聚丙烯制成,具有强度高和化学惰性。深圳蛋白分离离心管厂家
使用超滤离心管时,应注意控制转速,以避免过度旋转导致超滤膜损坏或溢出样品。深圳蛋白分离离心管厂家
我们通常会以1/3到1/6甚至更低的区间来选择超滤管的孔径,通常更小的孔径会使回收率提高但是超滤的时间也会比较长。一定范围内,超滤的回收率和速度是一对矛盾体,因此可以通过优化孔径的选择,在回收率可以接受的条件下选择较大的孔径,来提高超滤的速度。低温如< 10 ℃,液体的粘度会增加,流动性会降低,因此液体的跨膜速率也会降低。适当提高超滤温度,往往能够提高超滤的速度。有些客户需要做几十ml到几百ml样品的浓缩或者缓冲液置换,但是却使用1支或几支15ml的超滤管反复离心来完成操作,这样必然造成时间上的浪费。怎么办?一定要挑选适合处理量的产品,减少不必要的反复离心从而提升超滤的效率。深圳蛋白分离离心管厂家