外泌体的提取方法:免疫磁珠法,这种方法可以保证外泌体形态的完整,特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备,但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性,不便进行下一步的实验。PS亲和法,该方法将PS(磷脂酰丝氨酸)与磁珠结合,利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似,获得的外泌体形态完整,纯度较高。由于不使用变性剂,不影响外泌体的生物活性,外泌体可用于细胞共培养和体内注射。PS法可提取相当高纯度的外泌体。色谱法,这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一,但是需要特殊的设备,应用不宽泛。外泌体是一种由活细胞分泌的,直径约为40~160nm的具有双层膜结构的生物活性囊泡。脑脊液外泌体miRNA测序
中流细胞分泌的外泌体可以通过体液进入特定qi官,建立有利于ai细胞生长的微环境,包括促进受体细胞上皮细胞-间充质转化、引发炎症、促进血管生成,为ai细胞的扩散形成有利条件。进一步研究发现中流细胞外泌体能够引导ai症转移至特定qi官,在膜表面特异性整合素的作用下,中流细胞外泌体首先在特定的qi官累积,引起受体qi官产生炎症、生成血管,形成有利于中流转移的微环境,使得中流细胞更容易转移至该qi官。Maji等揭示了恶性中流细胞外泌体中的AnnexinⅡ蛋白能够促进血管生成,为中流转移创造有利的微环境。脑脊液外泌体miRNA测序活内的外泌体动态(哪个外泌体迁移至何处)也会成为今后需要努力研究的重要课题。
外泌体是细胞在特定条件下分泌的小囊泡,是细胞间传递信号,相互沟通和影响的重要工具,它可以直接进入受体细胞影响细胞功能。外泌体PK细胞因子:磷脂双层膜结构,可保护内容物,包含多种细胞因子可直接进入受体细胞。外泌体PK干细胞:无免疫排斥,体积小穿透力强,可避免伦理道德争议。年轻的脂肪组织中提取外泌体,在特定条件下扩大培养出具有调控毛发根部的囊干细胞功能的外泌体,包含多种细胞因子的外泌体直接进入毛发根部的囊细胞,恢复毛发根部的囊干细胞的正常功能。
外泌体本身的惰性相当高,但它们与细胞膜融合可将所携带的物质和信号传递到受体细胞并改变其生物学功能,因此,外泌体是纳米药物递送或基因治理的潜在载体。外泌体作为功能性小RNA和蛋白质的天然载体也引起了药物递送领域的极大兴趣,因为它可以利用这些囊泡治理性递送各种核糖核酸分子、肽和合成药物。外泌体作为疾病诊断标志物的潜在应用依赖于基于外泌体的药物递送系统的技术突破,要将其用于临床治理,外泌体的大规模工业化生产还面临很大的挑战。首先,对外泌体的具体合成机制、功能了解并不是非常详细。其次,现在缺乏经济有效的外泌体分离技术。外泌体的异质性决定了外泌体药物递送系统要根据所传递治理物质的类型、目标组织的特点等进行针对性的调整。
由于特殊的结构和循环方式,外泌体作为药物运输的载体具有独特的优势。例如外泌体的尺寸分布能够增强渗透滞留效应,从而有选择性地深入中流组织;其外层磷脂双分子层可以保护内容物不受各种生物酶的影响,维持各种生物分子的活性;外泌体普遍存在于各种体液和组织中,其体积小,结构、组成与细胞膜类似,导致外泌体可以在避开免疫系统监督的同时深入组织内部,有较好的生物相容性;当采用内源外泌体时,能明显降低其他药物载体可能引起的有害免疫反应;除此之外,某些细胞来源或经特殊修饰过的外泌体具有良好的特异性,可以与特定的qi官或组织结合。随着EV研究倍受世界瞩目,各国启动了大型研究项目。脑脊液外泌体miRNA测序
外泌体给后续实验产生了许多障碍。脑脊液外泌体miRNA测序
外泌体富含蛋白质、脂质和核酸分子,这些分子具有来源细胞的特异性,所以通过分析中流细胞所释放的外泌体分子特征就可部分反映其来源细胞表型及其生物学作用。现已发现多种中流外泌体来源的蛋白类分子标志物。例如,乳腺ai、结肠ai和胰腺ai中均可检测到磷脂酰肌醇蛋白聚糖1(glypican1,GPC1)的表达,且与乳腺ai和结肠ai相比,GPC1对胰腺ai的早期诊断尤具价值。前列腺ai患者血浆外泌体中凋亡抑制蛋白的表达增高则提示与中流进展相关。随着蛋白组学技术的发展,研究发现中流患者血液外泌体来源的蛋白标志物其诊断特异性和敏感性分别可达到95%和90%。脑脊液外泌体miRNA测序