在运输DOX的研究中,Wei等选择了已经在临床上使用的未成熟的树突细胞作为母代细胞,通过化学转染使其分泌的外泌体表面含有Lamp2b,这种蛋白可以与αv整合蛋白特异性iRGD肽结合,使外泌体对DOX的运输具有靶向性。将对iRGD肽靶向的外泌体和未经靶向性处理的外泌体用DiR染料标记,并分别静脉注射入移植了人乳腺ai细胞的小鼠体内,观察到靶向的外泌体在注射30min后已经出现在中流组织处,在注射2h后外泌体的含量高,而未经靶向性处理的外泌体在注射后主要集中在肝脏,几乎很少到达中流组织处,说明对iRGD肽靶向的外泌体具有很好的靶向性。外泌体膜蛋白可以与靶细胞膜蛋白结合,进而唤醒靶细胞细胞内的信号通路。植物外泌体tmt
中流细胞分泌的外泌体可以通过体液进入特定qi官,建立有利于ai细胞生长的微环境,包括促进受体细胞上皮细胞-间充质转化、引发炎症、促进血管生成,为ai细胞的扩散形成有利条件。进一步研究发现中流细胞外泌体能够引导ai症转移至特定qi官,在膜表面特异性整合素的作用下,中流细胞外泌体首先在特定的qi官累积,引起受体qi官产生炎症、生成血管,形成有利于中流转移的微环境,使得中流细胞更容易转移至该qi官。Maji等揭示了恶性中流细胞外泌体中的AnnexinⅡ蛋白能够促进血管生成,为中流转移创造有利的微环境。外泌体试剂盒提取活内的外泌体动态(哪个外泌体迁移至何处)也会成为今后需要努力研究的重要课题。
外泌体有很多潜在优势,但是外泌体在药物递送中的应用研究才刚刚起步,尚有许多问题需解决:如何修饰外泌体的靶向性:缺氧瘤细胞来源的外泌体倾向于向缺氧瘤组织内募集;此外,还可通过在外泌体膜表面设计与靶细胞特异性结合的抗体、配体或受体来实现。如何提高药物装载效率:目前主要有①前装载方法(首先将药物加载到母细胞中,随后外泌体形成并包裹药物分泌到细胞外,常用的方法如转染、共孵育等);②后装载方法(直接将药物加载到外泌体中,例如孵育、电穿孔、超声、挤出、冻融循环等);③其他装载方法(主要是通过生物工程修饰母细胞来实现)。如何实现外泌体的大量生产:目前大规模生产外泌体的方法主要是自发生产和非自发生产。
外泌体及活性蛋白能直接穿透皮肤间隙,快速直达基底层起效;富含100+多种胞外基质蛋白、胞外基质酶以及细胞黏附分子;能够有效促进皮肤成纤维细胞(HDFs)中I型胶原蛋白、成纤维蛋白,促进皮肤有效快速再生(Rejuvenation);能够有效促进皮肤成纤维细胞(HDFs)弹性蛋白生成,保持皮肤饱满和弹性;有效降低皮肤成纤维细胞(HDFs)中胶原蛋白酶(MMP-1)的生成从而防止皮肤间质中IIIIII型胶原蛋白被降解;富含活性物质能够促进皮肤有些血管的修复与重建再生。外泌体本身的惰性相当高,但它们与细胞膜融合可将所携带的物质和信号传递到受体细胞并改变其生物学功能。
利用蛋白质免疫印迹和酶联免疫吸附分析技术可以对外泌体标志性蛋白质进行定性定量分析。其中蛋白免疫印迹是外泌体的经典表征手段之一,操作时往往需要细胞裂解液作为阴性对照。常用的外泌体标志性蛋白质包括四跨膜蛋白质CD63、CD81、CD9、中流易感基因101蛋白(TSG101)、水通道蛋白2(AQP2,尿液中)和凋亡诱导因子6相互作用蛋白(Alix)等,内参蛋白质可以是肌动蛋白(βActin)或甘油醛-3-磷酸脱氢酶,阴性对照蛋白可以是阻抑素(PHB,线粒体标志蛋白)或钙联结蛋白Calnexin。在酶联免疫吸附析法中,外泌体裂解液通过固载有抗体的固相基质,随后与检测抗体共孵育。两种方法均存在操作繁琐、耗时长的问题,相比较而言,酶联免疫吸附分析法比蛋白质免疫印迹法更加快速,适用于高通量分析。血液中的成纤维细胞所释放的外泌体,可以促进角质形成细胞的移动和增殖以及血管新生来促进伤口愈合。重庆外泌体
神经细胞来源的外泌体含有与神经退行性疾病相关的分子。植物外泌体tmt
Exosome(外泌体)是由活细胞分泌小囊泡,具有典型的脂质双分子层结构;参与细胞之间的交流,物质的运输以及正常生理过程的维持,此外还与疾病的产生有关。对分离的外泌体进行体外标记或示踪,有助于对外泌体的功能进行进一步的研究。目前对于外泌体的标记方法有很多种,包括亲脂性的染料和膜渗透型的化合物等。PKH67的体内荧光半衰期为10-12天。相比于PKH-67,PKH-26具有更长的半衰期,标记在兔红细胞上的PKH26半衰期长达100天以上。特别适用于体外增殖研究以及长期的体内细胞跟踪研究。植物外泌体tmt