安徽干细胞外泌体

利用抗ai症药物进行中流zhiliao是抑制中流的一个重要方法，不过目前抗ai症药物的运载存在着种种挑战，主要体现在以下几点:(1)抗ai症药物的疏水性;(2)抗ai症药物的毒性以及非靶向性;(3)易被人体清chu，体内循环的半衰期很短等。采用外泌体运输抗ai症药物，可以提高药物体系的水溶性，降低药物对人体的毒性以及避免被网状内皮系统捕捉从而延长其循环时间。近期，两种抗ai症药物———紫杉醇(PTX)和阿霉素(DOX)已经成功被载入外泌体中，并对其抗中流作用进行了研究。外泌体不只可作为疾病诊断的生物标志，而且可作为天然的药物传递载体。安徽干细胞外泌体

外泌体的提取方法：超速离心法，这是外泌体提取比较常用的方法。超速离心法得到的外泌的体量比较多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块，由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种方法得到的是微泡而不是外泌体。过滤离心法，这种操作简单、省时，不会影响外泌体的生物活性，但同样存在纯度不足的问题。密度梯度离心法，用此种方法分离到的外泌体纯度高，但是前期的准备工作繁杂，比较耗时，量少。山东CD9外泌体慢病毒外泌体天然的可以携带遗传到靶细胞中，从而在生物学和致病过程中诱导遗传修饰。

与干细胞不同的是：干细胞外泌体对受损的微环境不响应，但它可以通过改变细胞外基质，改变受体细胞的转录组和蛋白质组，来调节细胞凋亡，生长，增殖和分化途径。因此，干细胞外泌体具有减少细胞凋亡、减轻炎症反应、促进血管生成、抑制纤维化、提高组织修复潜力等重要生物学功能，在调控组织再生方面存在良好的临床应用前景。干细胞外泌体的优点，体积小：纳米级粒子，大小约为细胞的1/200，因此能很好地被人体所利用。免疫反应程度低：外泌体不是细胞，只作为载具，外膜的表层上呈现较少的抗原，免疫系统难识别，对人体影响小。可穿透血脑障壁：体积小加上脂质外膜的特性，使其可以通过血脑障壁，抵达脑部组织。

外泌体是由细胞细胞质内的晚期内泡小体以膜融合的方式通过胞吐方式主动分泌到细胞外环境的一种直径30-100nm的微型囊泡，其形态规则，呈圆形或椭圆形杯状结构，不同类型细胞分泌的外泌体具有很多共性，包括膜上富含脂筏及丰富的跨膜蛋白，如四次跨膜蛋白家族成员CD63、CD81等，表面为类似于细胞膜的脂质双分子层，具有一定的疏水性。外泌体能够携带微小RNA(microRNAs,miRNAs)、RNA、蛋白质等生物活性分子，并在细胞外环境稳定存在，而且通过传递供体细胞信息，调节靶细胞的代谢通路。外泌体可由多种类型细胞分泌，妊娠期母体血清中存在表达胎盘碱性磷酸酶（placentalalkalinephosphatase,）的胎盘来源外泌体，并且在妊娠中发挥重要的作用。突状细胞释放的外泌体可以强化杀伤性T细胞对症状细胞的特异性反应。

多项研究表明中流细胞来源的外泌体能够抑制免疫相关的信号通路、阻碍机体对中流的免疫响应。Chen等研究发现黑色素瘤细胞、乳腺ai和肺ai细胞会产生携带程序性死亡分子1的配体(programmedcelldeath1ligand1，PD-L1)的外泌体，此类外泌体在血液中循环，通过表面PD-L1与T细胞结合，导致T细胞在到达中流细胞之前即受到抑制，达到远程干扰免疫细胞活性的效果。中流来源的外泌体能够抑制骨髓来源的抑制性细胞(该细胞是树突状细胞(dendriticcells，DCs)、巨噬细胞和(或)粒细胞的前体，具有抑制免疫细胞应答的能力)对中流的免疫监督。中流细胞来源的外泌体与巨噬细胞共孵育后，其内的miRNA-301a通过下调抑ai基因PTEN)，激huoPI3Kγ(phosphoinositide3-kinaseγ)信号分子，使巨噬细胞被“驯化”成为能参与抗yan反应、血管生成以及促进中流生长转移的M2型巨噬细胞。泌体是细胞内源性的小囊泡，由大多数细胞分泌。安徽干细胞外泌体

日本和光着眼于巨噬细胞的外泌体受体Tim4蛋白，制备Tim4细胞外域与磁珠结合的“Tim4磁珠”。安徽干细胞外泌体

目前，提取外泌体的方法主要有超速离心法、PEG沉淀法，但这些方法混有非常多的杂质，必须慎重分析得到的是否是外泌体。超速离心法存在操作繁杂、回收量不稳定，不能用于定量分析、必须使用昂贵的超速离心机、无法进行多样品分析等问题。因此外泌体研究相对困难，需要尽快开发操作简单、可提取高纯度外泌体的技术。因此，日本和光着眼于巨噬细胞的外泌体受体Tim4蛋白，制备Tim4细胞外域与磁珠结合的“Tim4磁珠”。Tim4通过磷酯酰丝氨酸（PS）法特异性结合Tim4蛋白和磁珠，再经过含有EDTA的洗脱缓冲液进行分离，提取高纯度的完整外泌体。安徽干细胞外泌体